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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
 Inserito il - 04 marzo 2007 : 14:56:27
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Qualcuno ha mai creato una proteina di fusione con l'epitopo V5 per poi verificarne la presenza su gel con anticorpi specifici?
Commenti? Consigli?
grazie grazie
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 04 marzo 2007 : 15:52:45
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L'ho fatto qualche anno fa per un progetto che però poi è stato abbandonato, non ricordo bene tutto il materiale che ho usato... ma in laboratorio dovrei avere ancora il mio vecchio quaderno e tutte le metodiche, quindi se hai bisogno posso controllare!
Dovevo far esprimere una proteina di fusione-His tagged in Coli (non ricordo esattamente qual'era il vettore!), a parte il fatto che non sembrava che i miei Coli fossero molto collaborativi nel produrre la proteina... avevo poi provato a verificare la presenza della proteina direttamente su gel con un kit fatto apposta per evidenziare il tag di istidina (InVision™ His-tag In-gel Stain), la cosa sembrava fantastica... ma non è funzionato niente... per non parlare del fatto che il servizio tecnico mi hanno tenuto in ballo mesi senza nè risolvere il problema, nè sostituirmi o rimborsarmi il prodotto!!! Quindi quel kit non te lo consiglio, può essere utile invece lo standard (che ti vendevano anche nel kit): BenchMark™ His-tagged Protein Standard .
Mi sembra che avessi preso anche un anticorpo anti-His... ma al momento non ricordo altro, proverò a controllare in laboratorio!
Che alre info hai bisogno?
Ciao |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 04 marzo 2007 : 17:26:57
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Mmmm... Grazie, ma tu parli di His-Tag, mentre io mi riferivo specificamente a V5...
La teoria e' la stessa credo, no? Ma c'è un criterio per scegliere un metodo rispetto all'altro o va semplicemente a gusto personale (se non a disponibilita' di materiale, ovvio)? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 04 marzo 2007 : 17:57:37
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 Ops! Hai ragione!
L'errore è dato dal fatto che cercando il vettore, ho trovato vari vettori V5-His... non ho più pensato a V5, la al tag di Istidine!
Comunque penso che la differenza sostanziale sia che il tag di istidine è comodo per la purificazione! Riguardo la rivelazione della presenza su gel non credo che ci siano grosse differenze. Non so che vettore useresti, comunque in genere nel vettore ci sono entrambi! |
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valia
Moderatore
Prov.: UK
1001 Messaggi |
Inserito il - 04 marzo 2007 : 18:11:55
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Non so neanch'io che vettore userei, le mie idee sono ancora ad un livello teorico-embrionale... 
Grazie mille!
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