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Asator
Nuovo Arrivato
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 Inserito il - 07 ottobre 2014 : 12:08:56
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Buongiorno a tutti, sto cominciando a scrivere un progetto nella speranza di ottenere un post-doc. Premesso che lavoro nel campo vegetale, sono interessato a studiare le interazione tra la mia proteina di interesse e il resto del proteoma.
Conosco la teoria alla base dello yeast two hybrid, ma ho un'esperienza diretta molto limitata. Spero che qui qualcuno con un po' di esperienza possa aiutarmi a capire meglio.
1) considerando che la mia proteina di interesse e una proteina transmembrana, direi che il metodo che fa al caso mio è quello dello split ubiquitin yeast two hybrid. Quello che non mi è chiaro è: con questo sistema posso identificare le interazioni solo con altre proteine di membrana o anche con proteine solubili? Immagino che dipenda dal tipo di libreria che utilizzo, giusto?
2) è possibile usare lo yeast-two-hybrids per studiare interazioni tra specie diverse, nello specifico tra una proteina della pianta e il proteoma di un patogeno fungino? Inoltre, se io volessi fare uno studio ad ampio spettro, cioè tutte le possibili interazioni pianta-patogeno e non solo con la mia proteina target, che sistema consigliereste?
3)Ho letto qualcosa sullo yeast one hybrid, ma non sono sicuro di aver capito bene come funziona: posso usarlo per identificare quale proteina si lega al promotore di uno specifico gene o funziona solo al contrario, cioè per identificare a quale promotore si lega la mia proteina?
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Yeast Two Hybrid & One Hybrid
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