Esercizio concentrazione DNA [Era: Help esercizio]

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Autore

Discussione

miguar
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: Sorrento

1 Messaggi

Inserito il - 07 marzo 2007 : 18:08:22

La mia prof al primo giorno di corso ci ha posti questo esercizio sapreste darmi una mano?
Grazie mille!!!

Viene fornita una provetta contenente DNA genomico in soluzione.

1-Il campione viene diluito 100 volte e determinata l'assorbanza allo spettrofotometro.
A260= 0,05 O.D.
A280= 0,024 O.D.
A230=0,022 O.D.

Domanda: [DNA]=?
Risposta:

2-Indicare il volume di soluzione contenente:
0,25microgrammi, 1microgrammo , 10microgrammi di DNA

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 07 marzo 2007 : 18:56:30

1-La concentrazione di DNA si ricava dalla Assorbanza a 260nm utilzzando legge di Lambert-Beer:

Semplificando un po� le cose� per il DNA si utilizza una costante fissa che � pari a 50 (40 per l�RNA)

[DNA]ug/ml= A260 x 50 x fattore di diluizione

i valori di A280 e A230 ti servono per calcolarne la purezza con i rapporti:

A260/A280 = vedi la contaminazione da proteine
questo rapporto dovrebbe essere maggiore o uguale a 1,7-1,8

A260/A230 = vedi la contaminazione da carboidrati e fenoli
questo rapporto dovrebbe essere circa 2.2

In alcuni casi si legge anche a 320 nm, se un campione � puro l�assorbanza dovrebbe essere zero.

2- Sapendo la concentrazione del tuo campione non dovrebbe essere difficile calcolare questi volumi!

Prova a risolverli!
Ciao