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Caladenia
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 10 gennaio 2015 : 16:02:57
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Ciao a tutti!
Quando in un'elettroforesi 2D si applica il voltaggio, l'unità di misura utilizzata è il volt*hour. In un articolo c'è scritto :
500 V gradient for 30 min , 1000 V gradient for 1h, 4000 V gradient for 1.5h, and 5000 V step in hold for 45 min, 500 V step in hold for several h until 14000-18000 Vh total.
Se moltiplico ogni voltaggio per il suo tempo (500 V * 0.5 h + 1000 V * 1 ETC ) viene 11000 vh. Perché il valore non corrisponde ai vh totali(14000 - 18.000)? Cosa significa "500 V step in hold for several h until 14000-18000 Vh total" e perché è un range? Qualcuno lo sa?
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 11 gennaio 2015 : 14:06:35
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Citazione:
Perché il valore non corrisponde ai vh totali(14000 - 18.000)?
Immagino che il motivo sia che non hai aggiunto l'ultimo passaggio, in cui tieni 500V fino ad arrivare a 14000-18000 Vh.
Mai fatto un'elettroforesi 2D però, quindi non ti so dire esattamente perchè un range. Immagino che, come per una normale elettroforesi, guardi il gel e quando vedi una buona separazione fermi la corsa... |
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Caladenia
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 14 gennaio 2015 : 09:13:49
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Si infatti -.-" bastava moltiplicare le ore rimanenti * i 500 V! Ah ok, quindi il range è perché ti regoli in base a occhio ed esperienza, come tutto alla fine !  Grazie mille! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 14 gennaio 2015 : 11:59:12
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Solo un paio di considerazioni:
quello é il protocollo per il focusing (la 1° dimensione), non hai il gel ma solo una striscetta di carta in cui le proteine si separano secondo il punto isoelettrico.
Qundi non segui la migrazione del gel e soprattuto "non vedi assolutamente niente".
Comunque sì il senso è quello che avete detto, per avere una "buona" focalizzazione devi arrivare a 14000-18000 Vh totali se stai più basso potrebbe darsi che non sia sufficiente e se stai più alto potrebbe essere troppo... quindi insomma la morale è la stessa: molto dipende dall'esperienza. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Caladenia
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 17 gennaio 2015 : 14:01:20
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| Grazie mille per la precisazione! |
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