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Autore

Discussione

CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 09 marzo 2007 : 18:44:33

SECONDO voi dopo defosforilazione di un vettore per l'uso successivo della ligasi come è necessario precipitare il DNA?
Qualcuno di voi ha già provato ad usare della ligasi scaduta? per voi funziona ugualmente?
Grazie

fatalerror
Nuovo Arrivato

Città: bruxelles

20 Messaggi

Inserito il - 09 marzo 2007 : 19:27:53

perchè devi precipitare il dna? non puoi trasformarlo in batteri, poi fare una coltura e 1 estrazione plasmidica????
non ho mai utilizzato una ligasi scaduta...non so risponderti

fatalerror
Nuovo Arrivato

Città: bruxelles

20 Messaggi

Inserito il - 09 marzo 2007 : 19:40:13

ops, rileggendo la domanda mi sono accorta che non l'avevo capita :-P
Credo che tu debba passare il tuo DNA su una colonna di purificazione (mi sembra che roche le fa). è semplicissimo e prende pochissimo tempo.
Per quanto riguarda la ligasi, visto che è scaduta e che quindi dovresti ricomprarla, ti consiglio Fermentas, 2 ore a T ambiente e il lavoro è fatto!

Marianna
Utente Junior

146 Messaggi

Inserito il - 11 marzo 2007 : 21:19:45

Io di solito faccio la purificazione del vettore con il kit Quiagen..ma mi hanno detto ke si può anke bypassare come step, in modo da nn perdere materiale.

X la ligasi scaduta nn saprei..ma siccome il clonaggio è un esperimento ke riesce "quando Dio vuole" io nn introdurrei anke la variabile "scadenza" nel protocollo...cmq puoi sempre provare..magari riesce e ci levi il dubbio pure a noi!

Farah

Anyra
Utente Junior

Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara

212 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2007 : 10:59:57

Ligasi scaduta funziona ugualmente, l'importante è che non sia rimasta fuori dal frigo e purchè non sia scaduta da oltre 10 anni.

Le colonnine Qiagen sono strepitose, quelle per la purificazione di reazioni o PCR.

Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw

Cangrande
Utente Junior

Prov.: Verona

280 Messaggi

Inserito il - 20 marzo 2007 : 13:58:01

Sulla scadenza non ci sono problemi . . .
e' un obbligo commerciale

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.