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benedetto.nicosia
Nuovo Arrivato



10 Messaggi
Inserito il - 10 marzo 2015 : 21:45:10  Mostra Profilo Invia a benedetto.nicosia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti!!!!
in questi giorni mi sono trovato a dover fare delle colture cellulari da cellule di ghiandole salivari di topo. Dopo il prelievo etc etc mi hanno fatto mettere le cellule con terreno di coltura nella classica "fiaschetta". Come faccio io visibilmente a capire se le cellule stanno crescendo?
qualche accorgimento da poter usare?
grazie

Caffey
Utente Attivo

ZEBOV

Città: Perugia


1496 Messaggi
Inserito il - 10 marzo 2015 : 22:43:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Caffey Invia a Caffey un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Se vuoi solo una stima ad occhio basta guardarle con un microscopio invertito.
Se invece hai bisogno di una misurazione più precisa le devi contare, ovvero metterle in un falcon, vortexare e prelevarne un'aliquota, marcarle con colorante vitale e poi contarle (a mano o con un couner). Questa procedura interrompe la proliferazione e quindi sarebbe meglio farla solo quando devi effettivamente recuperare le cellule, a meno che tu non stia costruendo un protocollo per sapere quanto a lungo coltivare le cellule.
Spero di essere stato d'aiuto.
[...] Hunc igitur terrorem animi tenebrasque necessest
non radii solis neque lucida tela diei
discutiant, sed naturae species ratioque. [...]

Titus Lucretius Carus
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benedetto.nicosia
Nuovo Arrivato



10 Messaggi
Inserito il - 20 marzo 2015 : 19:03:54  Mostra Profilo Invia a benedetto.nicosia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Microscopio invertito! Mi interessa solo sapere se si sono attaccate e stanno crescendo. Come lo capisco? forma delle cellule?
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 21 marzo 2015 : 01:45:48  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Capire se si sono attaccate: muovi gentilmente la flask mentre guardi al microscopio. Se le cellule se ne vanno in giro non sono attaccate!

Capire se stanno crescendo: conti quante ce ne sono in un campo visivo ogni giorno per qualche giorno e vedi se il numero aumenta! Se vuoi una quantificazione più precisa puoi fare uno staining per un marker di proliferazione tipo Ki-67.
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benedetto.nicosia
Nuovo Arrivato



10 Messaggi
Inserito il - 21 marzo 2015 : 11:24:23  Mostra Profilo Invia a benedetto.nicosia un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille ora è tutto più chiaro
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