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smile
Nuovo Arrivato
Prov.: Chieti
Città: chieti
4 Messaggi |
 Inserito il - 14 marzo 2007 : 12:00:48
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Ciao a tutti! Devo allestire un western blot, partendo dall'apparecchio. Nel mio laboratorio hanno già un mini-protean 3 Bio-rad, ma mancano i vetri. Guardando un pò in giro, ho visto che quelli che vanno bene con questa macchina hanno già gli spacer incorporati, ma gli spacer plates ppossono essere di diverso spessore e questo determina lo spessore del gel. Ne esistono di 0,5 mm, 0,75 mm, 1 mm, 1,5 mm. Qualcuno saprebbe consigliarmi quale è più utilizzato???
Aiutatemi vi prego!!!
Grazie.
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 14 marzo 2007 : 12:52:04
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naturalmente dipende dallo spessore al quale devi fare un gel! un gel più spesso sarà anche più resistente, rispetto ad uno sottile, ma questo dipende anche dalla concentrazione di acrilamide. che proteina cerchi?quanto pesa? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Zeus
Nuovo Arrivato
Prov.: Chieti
Città: Chieti
1 Messaggi |
Inserito il - 14 marzo 2007 : 20:43:36
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| Ciao nel nostro laboratorio utilizziamo il tuo stesso apparato per il western. Solitamente io utilizzo i vetri che permettono di preparare un gel di 1,5mm di spessore con il sisema della Biorad. Spero di esserti stato utile ciao e buon lavoro |
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fatalerror
Nuovo Arrivato
Città: bruxelles
20 Messaggi |
Inserito il - 14 marzo 2007 : 21:02:55
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ciao,
lascia perdere i o,5 e 0,75mm, sono troopo fini e quindi se vuoi mettere una quantità accettabile del tuo échantillion non vanno bene. Io ti consiglio 1mm o 1,5mm. con gli spacer plates di 1mm e dei pettini da 10-well puoi mettere 25 microlitri di échantillon, se poi vuoi poter mettere la stessa quantità ma vuoi poter avere + pozzetti sullo stesso gel allora puoi usare gli spacer plates da 1,5 mm ma con i pettini 15-well. Trovo che questi 2 formati siano l'ideale, quando fai 1 estrazione totale, nucleare o citoplasmatica a partire da cellule solitamente riesci ad avere tra i 30 e i 50 microgrammi di proteine per +/- 20 mirolitri, cio' che è sufficente per detettare una proteina in w.b. Se poi devi mettere su gel una quantità minore di "succo", non é un problema...il problema è +ttosto quando non hai abbastanza capienza nel tuo pozzetto per mettere abbastanza "succo"...quindi ripeto, prendi un 1mm o 1,5mm
ciao ciao |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 15 marzo 2007 : 14:32:45
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Anche noi abbiamo il mini protean 3 e usiamo i vetri da 0.75mm e non abbiamo mai avuto problemi di rottura del gel perchè troppo fine, solo con concentrazioni molto basse (5%) bisogna stare attenti perchè si storta o si può rompere!
Noi abbiamo spesso l'esigenza di caricare piccole quantità, quindi questo spessore va benissimo, e utilizziamo pettinini sia da 10 che da 15.
Ciao |
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Anyra
Utente Junior
Prov.: Pesaro-Urbino
Città: Saltara
212 Messaggi |
Inserito il - 20 marzo 2007 : 10:53:26
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Consiglio anche io gli spacer da 1 o 1.5, specialmente se non hai mai fatto gel o western.
Ricordati che devi ordinare anche i relativi pettinini con il giusto spessore, altrimenti sei a capo 12.
Ma tutto ciò è solo per il gel, per la corsa elettroforetica, e non per il WB.
Devi procurarti anche il modulo di trasferimento (quella specie di scatolina rosso - nera - non ha nulla a che fare con il milan -).
Ciao e buon allestimento |
Il mio Cavaliere
http://s4.battleknight.it/index.php?loc=hire&ref=OTA3NTAw |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 20 marzo 2007 : 18:26:11
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| IMHO se devi ordinare anche il blotter scegli un sistema semi-dry! |
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vetri per western blot
Didattica e Relazioni
