produzione eGFP da E.Coli

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Biologia vegetale
Autori Vari

Ologenesi
Daniele Rosa

Introduzione alla struttura delle proteine
Carl Branden, John Tooze

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Microbiologia e Immunologia

produzione eGFP da E.Coli

Nuova Discussione

Nuovo Sondaggio

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Risorse di Microbiologia & Immunologia:

Relazioni

Blog InsideMicro

Protocolli

Siti di Microbiologia e Immunologia

Ultimo notizie

GFP Coli purificazione

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

radames
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 30 giugno 2015 : 20:50:25

Ciao a tutti innanzitutto!
Sono francesco, studente di biotecnologie alle prese con un piccolo problema del quale non riesco a venire a capo.

Sto producendo, purificando e quantificando eGFP a partire da colture di E.Coli allo scopo di poterla usare come standard in modo da creare una retta di taratura che verr� utilizzata per quantificare l'espressione di eGFP in Benthamiana. (stesso principio delle rette con la BSA).

E fin qui tutto bene.

Il problema � sorto qualche giorno fa quando, andando a prendere i campioni in freezer a -20 �C, mi accorgo che hanno perso visibilmente di fluorescenza (data confermato successivamente da una lettura di fluorescenza).

Cercando di capire cosa � successo allora ho fatto una lettura spettrofotometrica del campione, risultato: uguali valori della prima volta che � stata quantificata. la protein aera quindi presente.
HO quindi fatto un estern blot per capire se fosse ancora intera o si fosse degradata col tempo e risulta essere praticamente dimerizzata.

La eGFP � risospesa nel buffer di eluizione utilizzato per la sua purificazione da colonna Ni_NTA (Sodio fosfato, pH=7.0, 50 mM e imidazolo 50 mM).

Qualsiasi consiglio o riflessione � ben accetto.

Grazie mille a tutti quanti!