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Autore

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lybra.83
Nuovo Arrivato

1 Messaggi

Inserito il - 30 marzo 2007 : 10:31:42

Ciao a tutti.In questi giorni sto eseguendo dei Western blot su linfomonociti per quantificare l'espressione di alcune proteine ma i risultati non sono incoraggianti: bande assenti e persino l'actina � poco rilevabile. Di solito uso un blocco di TTBS-latte 5% per 1h, un AbI 1:500 in TBS-latte 5% o/n e un AbII 1:2000 in TBS-latte 5%. Avete qualche consiglio? Magari per un metodo di estrazione su linfomonociti ben "collaudato" ed efficace?Grazie a tutti

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2007 : 14:03:18

Togli tutto quel latte dagli anticorpi. mettine di meno.

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2007 : 16:02:48

Citazione:
Messaggio inserito da Dionysos

Togli tutto quel latte dagli anticorpi. mettine di meno.

Quoto!Che ne dici di un 2,5% ?!

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

drophy
Nuovo Arrivato

Prov.: lecce
Citt�: copertino

11 Messaggi

Inserito il - 31 marzo 2007 : 19:49:06

Potresti provare a diluire l'anticorpo in TBS-tween 0.1%

gadano
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Citt�: roma

22 Messaggi

Inserito il - 19 aprile 2007 : 22:58:25

come prepari i campioni che carichi? io posso consigliarti qualche protocollo per lisare le cellule ma prima dimmi come fai tu giusto per escludere sia quello il problema. e prova a fare la tubulina, di solito � abbastanza espressa.

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 20 aprile 2007 : 13:34:06

Citazione:
Messaggio inserito da Dionysos

Togli tutto quel latte dagli anticorpi. mettine di meno.

d'accordissimo. Per il blocking va bene al 5%, ma per le incubazioni con gli Ab io direi di usarlo al 3%. Importantissimi i lavaggi.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...