| Autore |
Discussione |
|
|
ru
Nuovo Arrivato
14 Messaggi |
 Inserito il - 09 giugno 2016 : 14:37:43
|
Salve a tutti,
ho una domanda riguardo la fase di ligation durante il cloning dell'inserto nel vector.
Il protocollo che ho dice:
xul digested vector (50ng)
1ul oligo duplex diluted
5ul 2x quick ligase buffer
xul Acqua
subtotale: 10ul
1ul Quick Ligase
totale: 11ul
Fin qui tutto ok... ma il mio problema è che del vettore per avere 50 ng devo aggiungere 10ul e quindi arrivo immediatamente al subtotale senza poter aggiungere gli altri reagenti.
Come posso ovviare a questo problema?
Grazie a chiunque saprà darmi un consiglio.
Saluti
Roberto
|
|
|
|
|
là
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 09 giugno 2016 : 16:49:45
|
| Io sforerei il totale di reazione del protocollo, e lo dico perchè ho fatto ligazioni anche da 30ul senza alcun problema. Ti consiglio di incubare la reazione a 15°C nel termociclatore. |
 |
|
|
ru
Nuovo Arrivato
14 Messaggi |
 Inserito il - 16 giugno 2016 : 16:35:53
|
| ok grazie mille proverò cosi! |
|
|
| |
Discussione |
|
Ligation-Clonaggio
Didattica
