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anna8311
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 03 aprile 2007 : 12:20:16

salve a tutti...dovrei fare un clonaggio di un gene in un vettore in cui c'� gi� un altro gene che non mi serve......non s� se � meglio inserire il mio gene nello stesso sito di quello che gi� c'� (il mio gene lo estraggo per pcr perci� devo decidere alle estremit� che sito di restrizione metterci...) o usare un sito diverso...magari facendo prima richiudere il plasmide e poi lo ritaglio.......

Sissy
Nuovo Arrivato

Prov.: Varese

12 Messaggi

Inserito il - 11 aprile 2007 : 11:39:36

Ciao! Non so quanto posso esserti di aiuto perch� ho fatto una tesi completamente diversa per� gli esami gli ho fatti!
Il gene che non ti serve, come dici,lo togli.e guadagni "spazio".Poi dipende se quello che hai tolto � sotto un promotore forte(o che va bene) il gene che devi inserire lo metti li' o se no da un'altra parte del vettore.Spero di di esserti stata d'aiuto.Ciao

orcaimpetuosa
Utente Junior

234 Messaggi

Inserito il - 20 aprile 2007 : 23:56:11

perch� nn toglierlo?

Cangrande
Utente Junior

Prov.: Verona

280 Messaggi

Inserito il - 19 maggio 2007 : 14:56:33

Magari il primo gene lo avevi inserito in una zona che ti avrebbe permesso la successiva selezione. Controlla anche quello.

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.

Dulbecco
Nuovo Arrivato

Prov.: Roma
Citt�: roma

9 Messaggi

Inserito il - 02 giugno 2007 : 18:51:31

secondo me � meglio togliere il gene che non ti serve soprattuto se il vettore con il tuo gene ti servir�,in futuro, per trasfettare cellule in modo da ottenere un prodotto proteico. se conosci i siti di restrizione per il gene che non ti serve puoi eliminarlo con una semplice digestione enzimatica. A questo punto defosforili il plasmide in modo che non si richiuda e poi puoi inserire il tuo gene di interesse con una semplice reazione di ligation. Cmq il tuo gene da inserire deve avere all'estremit� gli stessi siti di restrizione che hai utilizzato per eliminare il gene dal plasmide, in modo da inserirlo nella stessa posizione. spero di esserti stato da aiuto e spero di essere stao chiaro...