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Autore

Discussione

biomol
Nuovo Arrivato

65 Messaggi

Inserito il - 04 aprile 2007 : 20:05:12

ciao.allora devo affrontare un nuovo tipo di esperimento che riguarda la trasfezione di un vettore in cellule eucariote (normali e tumorali).qualcuno mi pu� dare un protocollo da seguire?
grazie infinite e buona pasqua!

Black Mamba
Nuovo Arrivato

Citt�: Roma

24 Messaggi

Inserito il - 04 aprile 2007 : 22:13:42

SI LAVORA SOTTO CAPPA...
PREPARATI LE EPPENDORF IN DOPPIO SU UN REC ..
NELLA PRIMA FILA DI EPPENDORF METTI 500 MICROLITRI DI opTimem + I MICROLITRI DEI TUOI CAMPIONI DI DNA, MENTRE NELL ALTRA FILA METTI 500 MICROLITRI DI OPTIMEM + 4 MICROLITRI DI LIPOFECTAMINA.

DOPO AVER FATTO CI�, UNISCI IL CONTENTUTO DELLE EPPENDORF MESCOLANDO BENISSIMO CON LA GILSON ....

SI ASPETTANO 20 MINUTI PER FAR SI KE IL COMPLESSO SI FORMI.

NEL FRATTEMPO ( MENTRE ASPETTI I VENTI MINUTI) LAVI LE TUE FIASKE DI CELLULE O I TUOI POZZETTI DELLE MULTIWELL CON OPTIMEM...DOPO AVER LAVATO AGGIUNGI OPTIMEM ( IO DI SOLITO NELLE MULTIWELL DA 6 NE METTO PER OGNI WELL 1 ML).

TRASCORSI I 20 MINUTI PUOI METTERE IL CONTENUTO DELL 2 EPPENDORF NEI RISPETTIVI POZZETTI O FIASKE!!!

IL GIOCO � FATTO

N.B COSA IMPORTANTISSSSSSSSSSSSSSSIMA
DOPO 4 ORE DEVI CAMBIARE IL TERRENO... TOGLI TUTTO L OPTIMEM E AGGIUNGI IL TERRENO SPECIFICO DI CRESCITA PER LE TUE CELLULE ( KE DEVE CONTENERE OVVIAMENTE ANKE IL SIERO)!!!

IN BOCCA AL LUPO!!!

biomol
Nuovo Arrivato

65 Messaggi

Inserito il - 10 aprile 2007 : 14:53:16

grazie..anche se ho qualche domanda..tipo quanto � concentrato il tuo DNA?e qual'� il rapporto numero di cellule DNA, cio� quante cellule hai in ogni pozzetto?grazie comunque poi ti far� sapere com'� andtat!

Black Mamba
Nuovo Arrivato

Citt�: Roma

24 Messaggi

Inserito il - 10 aprile 2007 : 15:22:12

QS LO DEVO VEDERE SUL MIO QUAD ..COMUNQUE GENERALMENTE NE CARICO 1200 GAMMA

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 10 aprile 2007 : 23:34:29

Ciao Black Mamba!

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