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Mrs.who
Nuovo Arrivato

13 Messaggi

Inserito il - 05 marzo 2018 : 22:56:02

Buonasera a tutti, vorrei chiedervi un aiuto.
Perch� in una RT-PCR real time che utilizza un probe costituito da FAM-Quencher c'� bisogno di inserire nella mix anche il ROX?
Cio�, se si utilizza una sonda per avere pi� specificit� ed evitare di utilizzare semplici fluorofori che si legherebbero con specificit� minore e anche ai primers, perch� utilizzare entrambi?
Nel grafico finale le diverse curve non sono attribuibili solamente alla fluorescenza della sonda?
Scusate sembrer� una domanda stupida ma non trovo nessuno che me la risolva.
Grazie a tutti!!!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 09 marzo 2018 : 17:36:44

La funzione di ROX � quella di normalizzare, � un colorante fluorescente inerte, non partecipa alla reazione ma viene rivelato dallo strumento. La sua fluorescenza "dovrebbe" essere uguale in ogni pozzetto (perch� ce n'� la stessa quantit�), ma per vari motivi (errori) pu� essere letta in modo diverso nei diversi pozzetti, quindi normalizzando la fluorescenza del reporter rispetto la fluorescenza di ROX ottieni un valore corretto e pi� esatto.

Comunque in questo video � spiegato bene:
https://www.youtube.com/watch?v=qq0l_wyhFZo

Mrs.who
Nuovo Arrivato

13 Messaggi

Inserito il - 11 marzo 2018 : 14:59:28

Grazie infinite GFPina, davvero gentilissima!!!