Orientamento frammento all'interno del vettore

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Clacla
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 30 aprile 2018 : 08:49:49

Salve ragazzi, qualcuno potrebbe spiegarmi nel modo più semplice possibile come si faccia a capire l'orientamento del frammento che abbiamo inserito all'interno di un vettore?

Grazie in anticipo!SALUTI!

domi84
Moderatore

Città: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 30 aprile 2018 : 20:40:24

Un modo è la digestione diagnostica. Immagina il seguente frammento nel vettore, con un enzima che NON si trova al centro del frammento:

Vettore ---Enz1---|---250bp---Enz2-------750bp--------|---Vettore

Immagina ora di tagliare con Enz1 e Enz2, se il frammento è quello indicanto nel disegno ottieni un frammento di 250bp, se invece è capovolto ottienti un frammento di 750bp.

Spero sia chiaro.

P.S. non scrivere tutto maiuscolo, equivale ad urlare.

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

Clacla
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 01 maggio 2018 : 08:42:46

grazie mille, vorrei capire un po' meglio ed essere sicura di avere chiara la situazione...
Quindi per sapere come è orientato un frammento all'interno di un vettore dovrò utilizzare due enzimi, uno che taglia in un sito di restrizione e l'altro che taglierà in un altro sito di restrizione e uno dei due enzimi taglierà in maniera asimmetrica, in modo tale che:
- il primo enzima che taglierà in maniera simmetrica rilascerà frammento + vettore
il secondo enzima che taglierà in maniera asimmetrica rilascerà il vettore + 2 frammenti che saranno l'inserto?
in questo modo posso capire se il frammento è clonato in un senso o nell'altro?
Grazie ancora!

domi84
Moderatore

Città: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 01 maggio 2018 : 16:16:37

Citazione:
- il primo enzima che taglierà in maniera simmetrica rilascerà frammento + vettore
il secondo enzima che taglierà in maniera asimmetrica rilascerà il vettore + 2 frammenti che saranno l'inserto?
in questo modo posso capire se il frammento è clonato in un senso o nell'altro?

Mmm...Non sono sicuro di aver capito quello che vuoi dire.
Devi fare due tagli (non importa quanti enzimi usi 1, 2...10), uno sul vettore, piu' o meno vicino al sito di clonaggio. L'altro sul frammento (non al centro).
Calcola la lunghezza del frammento che ti esce a seconda che il l'inserto sia in una posizione o l'altra.
Prendi carta e penna, e disegna...ti aiutera'.