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adrenerg1co
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 20 settembre 2018 : 11:45:58
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Buongiorno ragazzi
Ho un controllo positivo, ovvero un batterio già sequenziato ed usato poi come controllo,che sta finendo, perciò la mia domanda è posso amplificare un amplificato ... dura nel tempo ... lo devo purificare perché duri?
grazie
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 20 settembre 2018 : 12:36:43
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Non siamo nella vostra testa, se volete aiuto dovete dare info comprensibili...
Citazione:
controllo positivo, ovvero un batterio già sequenziato ed usato poi come controllo
Un controllo de che? Crescita batterica? Genoma batterico? Produzione plasmidica? Produzione proteica? Tossine?
Citazione:
posso amplificare un amplificato
Si...ma di cosa???
Citazione:
lo devo purificare
Ma cheeee? E da coooosaaa?? |
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato... |
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adrenerg1co
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 21 settembre 2018 : 11:47:01
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in passato ho identificato una colonia batterica tramite sequenziamento; di questa colonia ho fatto una scorta, un agarino congelato.
esaminando successivamente colonie che mi parevano simili in pcr classica ho usato come controllo positivo il batterio presente nell'agarino identificato; per questo ora lo definisco controllo positivo.
ora ipotizziamo che tale scorta sia finita e che l'unico traccia del controllo positivo rimasto sia l'amplificato che ho preparato da far correre nel gel.
da qui arrivo alla domanda. l'amplificato del controllo positivo che non ho usato nel gel posso conservarlo in qualche modo per usarlo come controllo positivo in futuri gel? come lo conservo dato che gli amplificati durano poco? posso in qualche modo riamplificarlo per aumentarne le scorte?
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
Inserito il - 22 settembre 2018 : 10:16:22
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Sei hai ancora il contenitore dell' "agarino congelato" (eppendorf, falcon, piastra) anche vuoto, puoi passarci l'ansa di platino e striccarlo su una piastra per ricrescere il batterio ... aggiungerci un poco poco di mezzo e farlo ripartire (di solito rimangono sempre tracce di batteri nel contenitore vuoto sufficienti a ricrescerlo).
Citazione:
l'amplificato del controllo positivo che non ho usato nel gel posso conservarlo in qualche modo per usarlo come controllo positivo in futuri gel? come lo conservo dato che gli amplificati durano poco?
Di solito il DNA è stabile, lo metterei semplicemente a -20
Citazione:
come lo conservo dato che gli amplificati durano poco? posso in qualche modo riamplificarlo per aumentarne le scorte?
Puoi usarlo come stampo per PCR successive usando gli stessi primer, in modo da amplificarlo. Ti consiglio vivamente di sequenziare l'amplificato di tanto in tanto perchè la PCR tende ad introdurre degli errori e col passare del tempo potresti ritrovarti qualcosa di diverso da quello originale |
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Amplificato di un amplificato
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