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adrenerg1co
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 20 settembre 2018 : 12:13:31
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Ciao a tutti
Quali passaggi e strategie si devono fare per portare un protocollo di pcr classica ad uno di real time? si può fare sempre? cosa posso leggermi?
Grazie
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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adrenerg1co
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
Inserito il - 21 settembre 2018 : 11:39:51
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ci sono real time di presenza e assenza; a me interessa questo tipo ... l'amplificato è di 200 bp, penso che potrei usare anche gli stessi primer, e la proporzione con i reattivi e le temperature che non saprei impostare
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 24 settembre 2018 : 17:03:34
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In genere se l'amplificato è abbastanza piccolo (200bp come il tuo caso vanno benissimo) e non hai aspecifici nella tua amplificazione, puoi usare gli stessi primers anche per una real-time, con SYBrGreen.
Per le condizioni devi vedere la mix di real-time che utilizzi e qual'è la DNA polimerasi utilizzata, perché le temperature di anealing variano anche in base alla polimerasi. Però basandoti sulle condizioni della end-point poi fare delle prove. |
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da pcr classica a real time
Didattica
