Quanto è utile/interessante questa discussione:
| Autore |
Discussione |
|
|
atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 08 settembre 2003 : 00:41:19
|
Da una email ricevuta:
quote:
CIAO!mi chiamo Serena e sono iscritta al 4°anno di CTF alla Federico II a Napoli.Complimentissimi per il sito.mi sta diventando molto utile per preparare una parte dell'esame di bioch.applicata.Anzi...non so se è possibile farti delle domande forse stupidine per te ,ma importanti per me che stavano nel mio compito di biochimica(fatto ieri)e ke mi hanno lasciato perplessa.Ad esempio:
QUALI DELLE SEGUENTI TECNICHE POSSONO DIRMI LA PRECISA LOCALIZZAZIONE SUBCELLULARE DI UNA PROTEINA?
a)elettroforesi SDS
b)Western blotting
c)sequenza amminoacidica
d)Northern seguito da western
io l'ho buttata a caso e ho messo d).Mi ricordo anke ke al momento ho fatto un ragionamento ,ma non so più che tipo di ragionamento ho potuto fare!!Poi un'altra domanda:lo screening di una libreria di cDNA si può fare sia con PCR che con colony ibridization?
Ti ringrazio tantissimo se mi rispondi.Se non puoi fa lo stesso.Ciao ciao
|
|
|
|
|
atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 08 settembre 2003 : 00:42:16
|
Ciao Serena.
Scusami per il ritardo nella risposta, in genere non son certo così lento...
Tornando alle domande da te poste...
"QUALI DELLE SEGUENTI TECNICHE POSSONO DIRMI LA PRECISA LOCALIZZAZIONE
SUBCELLULARE DI UNA PROTEINA?
a)elettroforesi SDS
b)Western blotting
c)sequenza amminoacidica
d)Northern seguito da western"
Tecniche come l'elettroforesi non ti servirebbero: cosa useresti per farla?
La sequenza amminoacidica permetterebbe di trovare dei target di
localizazzione presenti durante la maturazione della proteina, ed il suo
indirizzamento all'interno della cellula.
Per la Western è utilissimo l'uso degli anticorpi che troverebbero
specificatamente la proteina, ma questa ricerca viene fatta da un pool di
proteine totali che non mi fornisce una esatta localizazzione della
proteina..
Si potrebbe fare una centrifugazione delle cellule lise, così da separare i
vari componenti subcellulari infuznione della dimensione, poi, prendere per
ogni fase un campione ed analizzarlo con tecniche tipo western.
In realtà la cosa più facile sarebbe inserire nella sequenza codificante per
la proteina un marcatore come una proteina fluorescente, che indicherebbe
alla vista di un microscopio a fluorescenza l'esatta ubicazione della
proteina, in vivo, all'interno della cellula (o sulla superficie).Questa
tecnica si chiama FISH (e la troverai presto nella sezione
www.molecularlab.it/principi/ insieme ad altre tecniche descritte in breve
già presenti).
Spero di esserti stata di aiuto... come è andato l'esame?
Grazie mille per la scelta del sito, e per i complimenti ^__^
Sto per implementare, oltre alla sezione di bioinformatica messa da poco,
anche un Forum, o forse un intera community in cui chiunque può postare i
propri articoli, lavori, commenti, news, domande e risposte, etc etc..
La cosa a te ti interesserebbe?
A presto,
Riccardo
|
 |
|
|
biotech
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
170 Messaggi |
 Inserito il - 26 ottobre 2004 : 11:44:58
|
Io per trovare la localizzazione cellulare ho usato in un laboratorio universitario la GFP (green fluorescent protein): normalmente si trova nei mitocondri (mi sembra), ma tramite trascritti di fusione si può legare ad altre proteine d'interesse. Una volta generato il trascritto di fusione per evidenziare le dimensioni della proteina ho usato prima l'elettroforesi in gel di poliacrillamide (o agarosio???) ( l'ho fatto a fine gennaio di quest'anno) e poi il Western Blot. |
http://boincstats.com/signature/user_1342603.gif |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 26 ottobre 2004 : 17:44:36
|
No, la GFP non si trova normalmente nei mitocondri!!! Non è endogena!!! Probabilmente nel laboratorio che hai fatto l'avevano legata ad una proteina mitocondriale e quindi si vedeva nei mitocondri.
Per quanto riguarda la domanda concordo con Ricky:
- la seq. aminoacidica ti può dare informazioni se è presente qualche sequenza segnale.
- il western blotting su frazioni cellulari è anche + utile.
Btw, al posto della FISH io proverei un'ICC (immunocitochimica) che è molto + veloce: in pratica fissi le cellule su un vetrino e poi ci metti sopra un anticorpo fluorescente x la proteina di interesse.
nICO |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
| |
Discussione |
|
|
|
Quanto è utile/interessante questa discussione:
| MolecularLab.it |
© 2003-24 MolecularLab.it |
|
|
|
Domande Varie
Didattica e Relazioni
