IL MISTERO DELLA MIA PCR

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very1986
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Inserito il - 03 febbraio 2019 : 10:40:48

Ciao a tutti....spero mi possiate aiutare.
Ho settato una PCR provando a diverse temperature il mio wt e il mio campione con il gene di interesse (ctr positivo). Mi setto per una temperatura di 60 gradi.Faccio una pcr (wt- gene di interesse- e campioni) e il mio wt a quella temperatura mi da diverse bande, come se non andasse bene, mentre il mio controllo positivo mi torna. Allora faccio una prova con diverse temperature per capire se il mio wt ha subito qualche problema e cosi partendo dalla madre mi preparo un nuovo wt. Anche questo mi da la banda a 60 gradi (molto piu leggera del mio wt vecchio) ma non a 65 e 69 gradi (anche il mio wt vecchio non mi ha dato bande a queste 2 temperature). Ieri ho corso i miei campioni a 65 gradi compreso il mio nuovo wt....tutto positivo per il mio gene compreso il controllo negativo con l'acqua.....qualcuno sa spiegarmi cosa puo essere successo????premetto il mio controllo negativo (solo acqua -mix-primer)per questa pcr l'ho sempre amplificato a 60 gradi mai a 65. GRAZIE MILLE