Calcolo attività enzimatica tramite assorbanza

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Maurizio12
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 02 giugno 2019 : 23:41:20

Buonasera, mi chiedevo se qualcuno potesse aiutarmi a risolvere questo problema; in particolare non riesco a capire quale volume totale (Vtot) inserire nella formula che ho riportato sotto e come tener conto del fattore di diluizione.
Scusate per il disturbo e grazie

determinazione dell’attività enzimatica
• Preparare 50 mL di una soluzione acquosa di ONPG alla concentrazione del 2.5 % m/v.
• Miscelare 5 mL di H2O con 5 mL di soluzione di ONPG.
• Sciogliere circa 1 mg esattamente pesato di b-GAL in 10 mL di H20 (Concentrazione finale di b-GAL: 0.1 %) e aggiungerli ai 10 ml precedenti.
• Dopo 2 minuti esatti, bloccare la reazione aggiungendo 10 ml di una soluzione 1 M di sodio carbonato.
Diluire la soluzione 1:100 con acqua deionizzata

Attività enzimatica = (A*Vtot)/(epsilon*t*Venz*d)= U/mL
dove:
A = assorbanza= 0,005
Vtot = volume totale della soluzione (mL);
Venz = volume della soluzione in cui è sciolto l’enzima (mL);
d = cammino ottico (1 cm);
t = tempo (min);
epsilon =coefficiente di estinzione molare @ 420 nm = 4,32*10^-3

domi84
Moderatore

Città: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 03 giugno 2019 : 15:34:25

http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=34851

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

Maurizio12
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 03 giugno 2019 : 17:35:28

Io avevo pensato di utilizzare come Vtot 30 mL dati dalla somma dei 5+5+10+10 e come Venz=10 e quindi trovo: att.enz= (0,005*30)/(0,00432*10*2*1)= 1,736 U/mL;dal momento che avevo fatto una diluizione 1 a 100 moltiplico il risulato per 100 e quindi 173,6 U/mL