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Oriantro
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 04 ottobre 2019 : 11:55:32

Salve a tutti.
Ho difficolt� a capire un passaggio di un esperimento in merito alla trasfezione.
Ho un campione di cellule HeLa dove voglio verificare gli effetti del silenziamento di un gene. Per fare ci� effettuo una trasfezione con plasmidi codificanti short hairpin RNA specifici per il gene da trasfettare. Fino a qui tutto ok. Per quanto riguarda i controlli,perch� si procede effettuando una trasfezione con shRNA CONTRO una SEQUENZA RANDOM DEL GENE GFP??? La GFP in tal modo non viene silenziata? Qual � lo scopo di questo silenziamento nei controlli?

domi84
Moderatore

Citt�: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 05 ottobre 2019 : 21:05:59

Il tuo "trattamento" (la trasfezione di per s�) causa degli effetti alla cellula. Come fai a sapere se quello che vai a vedere sar� l'effetto del tuo gene silenziato e non dovuto al trasfezione di per s�? Usi come controllo un shRNA contro una sequenza che non esiste nella cellula. In questo modo se quello che misuri � uguale nel controllo e nel tuo esperimento sai che � dovuto alla trasfezione e non al gene silenziato.
Pi� chiaro?

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

Oriantro
Nuovo Arrivato

4 Messaggi

Inserito il - 06 ottobre 2019 : 12:19:31

Grazie mille domi84! Sei stato molto chiaro! Questa purtroppo � la mia prima esperienza in laboratorio in quanto sto svolgendo un tirocinio per la tesi,dunque a volte o non riesco ad esporre i miei dubbi e le mie perplessit� per questioni di tempo oppure per evitare di fare figuracce!

Ti ringrazio ancora!
[quote]Messaggio inserito da domi84

Il tuo "trattamento" (la trasfezione di per s�) causa degli effetti alla cellula. Come fai a sapere se quello che vai a vedere sar� l'effetto del tuo gene silenziato e non dovuto al trasfezione di per s�? Usi come controllo un shRNA contro una sequenza che non esiste nella cellula. In questo modo se quello che misuri � uguale nel controllo e nel tuo esperimento sai che � dovuto alla trasfezione e non al gene silenziato.
Pi� chiaro?
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