curva di calibrazione

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poppo79
Nuovo Arrivato

8 Messaggi

Inserito il - 23 aprile 2007 : 16:52:29

ciao
vorrei che qualcuno mi spiegasse una cosa.
sto facendo un laboratorio per una tecnica denominata FACE ( fluorophore assisted carboidrate electroforesis) in cui attraverso una derivatizzazione ho fatto correre in gel di acrilamide 10 campioni di monosaccaridi.
dopo aver ottenuto i gel ( 5 campioni per 2 gel diversi) ho fatto le relative foto con polaroid.
dopodiche ho caricato per ogni campione quantit� crescenti da 1 microlitro fino a 5 microlitri per fare la curva di taratura o di calibrazione che si ottiene con un densitometro.
qualcuno mi sa spiegare come si fa e cosa serve sta curva di calibrazione?

ciao

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 23 aprile 2007 : 22:49:32

In questo post se ne parlava in riferimento ad un altro tipo di esperimento, ma l'idea � la stessa:

http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1378

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poppo79
Nuovo Arrivato

8 Messaggi

Inserito il - 24 aprile 2007 : 11:08:00

ok per� io non ho provette dove aggiungere campioni , io ho solo delle foto.

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 24 aprile 2007 : 13:17:46

Beh, con un software tipo ImageJ puoi calcolare l'intensit� delle bande nelle varie immagini e usare i valori di intensit� per creare la curva di taratura.

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poppo79
Nuovo Arrivato

8 Messaggi

Inserito il - 24 aprile 2007 : 23:55:36

ok per� mi riesci a fare un esempio pratico di come costruisco la curva?

Parti dal presupposto che io ho in mano 2 foto. una con 5 corse di 5 campioni diversi in quantit� di 5 microlitri e un altra foto con gli altri 5 campioni sempre in concentrazione 5 microlitri e 10 foto con ogniuna 1 solo campione diverso per foto fatto correre in 5 corsie in quantit� crescenti da 1 microlitro a 5 microlitri.

ti ringrazio ciao

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 25 aprile 2007 : 02:24:02

Asp... c'� qualcosa che non mi torna... forse perch� non conosco la tecnica.
Tu vuoi andare a misurare la concentrazione di questi campioni o che?
Non capisco perch� dovresti fare la taratura con gli stessi campioni... la taratura si fa con uno standard noto in modo che poi puoi confrontare il tuo standard con il tuo campione.

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