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ciottolina
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Inserito il - 24 aprile 2007 : 22:19:28  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ciottolina Invia a ciottolina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
posso farti un'alra domanda?sai come si fa a sintetizzare una sonda di rna antisenso.ho capito bene di come va clonato nel vettore ma non ho capito il procedimento dell'rna polimerasi grazie mille

chick80
Moderatore

DNA

Cittā: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 25 aprile 2007 : 01:44:42  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Solitamente si mette il cDNA del gene di interesse in un plasmide fiancheggiato da due promotori per RNA polimerasi differenti (es. T7 e SP6 RNA pol).

Hai qualcosa tipo:


-------SP6--*******SENSO*******-----------
------------*****OSNESITNA*****--T7-------


Se aggiungi al tuo mix la polimerasi T7 sintetizzi l'antisenso, se aggiungi la SP6 sintetizzi il senso!

Ovviamente devi aggiungere anche dei nucleotidi :)
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ciottolina
Nuovo Arrivato

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Cittā: varese


35 Messaggi
Inserito il - 25 aprile 2007 : 13:00:41  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ciottolina Invia a ciottolina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ok,fino a qui c'ero ma non capisco perchč fa l'antisenso,la direzione di trascrizione č sempre 5' 3' quindi usa come stampo sempre quello che va in direzion 3' 5' o sbaglio come la rascrizione normale..sarā banle ma propio non capisco
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ciottolina
Nuovo Arrivato

Prov.: Varese
Cittā: varese


35 Messaggi
Inserito il - 25 aprile 2007 : 13:02:46  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ciottolina Invia a ciottolina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
forse ho avuto un'illuminazione antisenso rispetto al normale rna messaggero e quindi complementare vero..dimmi che č cosi???
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chick80
Moderatore

DNA

Cittā: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 25 aprile 2007 : 13:50:57  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Esattamente!
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ciottolina
Nuovo Arrivato

Prov.: Varese
Cittā: varese


35 Messaggi
Inserito il - 25 aprile 2007 : 18:34:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di ciottolina Invia a ciottolina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie mille
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