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Autore Discussione  

lauretta
Nuovo Arrivato



9 Messaggi
Inserito il - 25 novembre 2004 : 11:16:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di lauretta Invia a lauretta un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti!negli ultimi giorni in laboratorio abbiamo avuto problemi con una pcr che proprio non ci viene!dobbiamo amplificare DNA tumorale estratto da paraffinato! abbiamo provato ad aumentare la quantità di magnesio, ad aumentare la quantità di DNA ed anche a riamplificare (usando come templato il prodotto di pcr sperando che ci fosse molto poco DNA e quindi non fosse visibile su gel!)!non abbiamo modificato il programma perchè aveva sempre funzionato!
aiutateci!!!!!!!!!!
Grazie

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 25 novembre 2004 : 18:51:49  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Siete sicuri che i primer funzionino? Li avete già usati su quel tipo di cellula? Sarebbe utile mettere anche un controllo positivo x vedere se è un problema della PCR o del tessuto.
In alternativa prova ad abbassare la T di annealing di 1-2 gradi, anche se potrebbe dare un po' più di sporco...

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biotech
Utente Junior

Prov.: Padova
Città: Padova


170 Messaggi
Inserito il - 26 novembre 2004 : 10:01:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di biotech  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di biotech Invia a biotech un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sei sicuro che anche la Taq funzioni bene?
http://boincstats.com/signature/user_1342603.gif
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Luixx
Nuovo Arrivato




10 Messaggi
Inserito il - 07 dicembre 2004 : 13:41:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Luixx  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Luixx Invia a Luixx un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
hai provato ad aumentare i cicli se pensate che la quantità di templato possa essere bassa
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Marianna
Utente Junior




146 Messaggi
Inserito il - 09 dicembre 2004 : 18:06:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Marianna Invia a Marianna un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Avete considerato che avete un DNA poco pulito che inibisce la Taq o che magari che vi si è inquinato qualcosa?


Marianna.
Farah
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