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Silvy
Nuovo Arrivato

Prov.: Bergamo
Città: Trescore Balneario


26 Messaggi

Inserito il - 22 maggio 2007 : 21:31:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Silvy Invia a Silvy un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,
ho un consiglio da chiedere in merito a un clonaggio blunt. Il problema è il seguente: ho clonato l'inserto (prodotto di PCR)nel vettore tagliato con BamHI e successivamente sottoposto a fill-in con la Klenow. Il sequenziamento ha però messo in luce che ci sono dei gap di una decina di nucleotidi sul vettore proprio in corrispondenza dei punti di inserzione dell'inserto. Mi chiedevo se ciò possa essere attribuito all'attività della Klenow, che agisce anche da esonucleasi, oppure a qualche altro fattore. Se qualcuno ha avuto problemi simili, sono ben accetti suggerimenti.
ciao ciao

Cangrande
Utente Junior

Cangrande Della Scala

Prov.: Verona


280 Messaggi

Inserito il - 25 maggio 2007 : 18:20:30  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Cangrande Invia a Cangrande un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Non credo sia la Klenow (manca di attività esonucleasica 5'-3')!
Io metterei degli adattatori per il riconoscimento di enzimi di restrizione che tagliano formando estremità coesive.
Il problema che di solito ho avuto con le estremità blunt però è stato di scarsa efficienza e non come nel tuo caso.

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.
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