| Autore |
Discussione |
|
|
Dulbecco
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: roma
9 Messaggi |
 Inserito il - 24 maggio 2007 : 21:14:17
|
Ciao, è da un mese che cerco di ottenere delle cellule trasfette capaci di produrre delle discrete quantità di proteina, ma ho ottenuto solo pochi microgrammi. Dato che ho trasfettato con lipofectamina le HEk-293 e il risultato non è stato proprio soddisfacente,vorrei chiedervi un pò di cose:
- Che linea cellulare scegliere per avere una buona stabile
- che metodologia di trasfezione
- quanto antibiotico mettere (il mio vettore ha neomicina come marcatore di selezione).
Grazie a presto 
|
|
|
|
|
AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 24 maggio 2007 : 22:45:11
|
come ho gia' detto nell'altro 3d io sto usando le CHO-S, proprio per avere
+ proteina (prima ero in SP2/0 arrivando a 2mg/L di proteina purificata)... sulla carta questa dovrebbero essere le cellule migliori...
Ho transfettato con AMAXA nucleofector, selezionando col g418... Ora cerco di avere dei monocloni da 'ste cells, poi, in caso, per la produzione togliero' l'antibiotico cosí da aumentare ancora la resa.
in bocca al lupo! |
 |
 |
|
|
Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 24 maggio 2007 : 23:49:33
|
- Le Hela (perdio non le cos-7!)
- di lipofectamine m'han parlato bene
- il G418 (genetecina) per la resistenza Neo
Togliere del tutto l'antibiotico non è mai una buona idea a mio avviso,
io consiglierei piuttosto di dimezzarne o, se proprio son stressate, decimarne la concentrazione.
Con le HEK avrai sempre gatte da pelare. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
|
|
|
|
Dulbecco
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
Città: roma
9 Messaggi |
Inserito il - 25 maggio 2007 : 23:13:12
|
ciaoo,grazie per l'informazione.Sai quanto antibiotico si utilizza?forse,però, mi conviene fare una titolazione...maa!! |
|
|
|
Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 25 maggio 2007 : 23:26:52
|
Dipende dal tipo cellulare: se sono particolarmente coriacee
puoi arrivare fino a 1 mg/ml di G418, ma io ti consiglio di
cominciare da 0,25 mg/ml ed eventualmente crescere man mano
durante la fase di selezione. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
|
|
|
| |
Discussione |
|
Trasfezione Stabile
Didattica
