determinazione concentrazione enzima

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riccardinho
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2007 : 12:42:02

Scusate ragazzi, devo fare una tesina e mi serve sapere in modo chiaro e facile come posso determinare la concentrazione di un enzima attraverso i diversi strumenti (spettrofotometro,ecc..)
Il mio professore mi ha detto che c'e' anche un altro metodo, che prevede l'utilizzo del NADH ma non ci ho capito molto, potete aiutarmi per favore ? grazie

Gabriele
Utente

Prov.: Pisa
Città: Pisa

615 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2007 : 13:07:43

Si riferirà al test ottico immagino,accoppi la reazione catalizzata dal tuo enzima (nel caso in cui non sia adatta già la sua) con un'altra reazione in cui si ha produzione o consumo di NADH.La concentrazione del NADH/NAD+ può essere facilmente letta allo spettrofotometro.

"Chi rinuncia alla libertà per la sicurezza, non merita né la libertà né la sicurezza. E finirà col perdere entrambe."

riccardinho
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 09 giugno 2007 : 13:34:21

allora, guarda, lui mi ha detto che ci sono due metodi:

1) per valutare la concentrazione di enzima si può misurare l'assorbanza in funzione del tempo.

2) si può inoltre misurare la concentrazione del NAD sfruttando il metabolismo microbico della cellula. Siccome il NAD assorbe a lunghezze d'onda ben precise, si può risalire alla concentrazione dell'enzima.

Ma come faccio a risalire a tale concentrazione ? puoi farmi un esempio di reazioni accoppiate come hai già detto per favore ? grazie

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 10 giugno 2007 : 00:19:54

Questo forse ti potrà aiutare:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1378

Il NADH è solo un esempio, che va bene se l'enzima usa/produce NADH. Altrimenti dovrai usare qualcosa di altro.

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