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Autore

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kiki
Nuovo Arrivato

97 Messaggi

Inserito il - 11 giugno 2007 : 00:57:04

Ciao!per l'estrazione Dna sto usando High Pure Pcr Template purification kit della roche,(x caso qualcuno lo usa?) nel sito della roche ho trovato che i filtrini che vengono utilizzati nel kit sono fatti di speciali fibre di vetro ("special galss fiber")..ma nn ho ben capito il preincipio..quello che mi chiedo �: essendo il dna carico negativamente ed essendo trattenuto dal filtrino,questo filtrino contiene gruppi carichi positivamente?Inoltre i vari reagenti hanno ph via via pi� elevato..questo serve x staccare dal filtro composti diversi a seconda della loro affinit�?

Grazie mille!!

elly_
Utente Junior

400 Messaggi

Inserito il - 13 giugno 2007 : 15:01:54

il principio e' quello della purificazione su colonna: il filtro di cui parli tu e' composto da una rete simile al gel che si fa sempre piu' fitta andando verso il basso. le molecole con un MW molto alto defluiscono ai bordi del filtro e vengono cosi' escluse, quelli con un MW molto basso entrano nella maglia ma non vengono trattenuti. Quelli con un peso intermedio (il DNA) rimane incastrato nelle maglie e viene stabilizzato dalle cariche positive del filtro.
Dopodiche' tu fai vari lavaggi a pH sempre maggiori: servono a eliminare in modo sempre piu' selettivo i contaminanti e i vari buffers legati al DNA con il solito principio di chimica: piu' lavaggi gli faccio piu' lo pulisco.

kiki
Nuovo Arrivato

97 Messaggi

Inserito il - 13 giugno 2007 : 15:52:24

Grazie mille per la spiegazione!!

ma quindi il filtro composto da una rete che si fa sempre pi� fitta andando verso il basso: significa che � composto da pi� strati? Grazie mille!

elly_
Utente Junior

400 Messaggi

Inserito il - 14 giugno 2007 : 11:00:20

questo non lo so. dovresti chiederlo alla ditta...