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Sara
Nuovo Arrivato
Città: Milano
2 Messaggi |
Inserito il - 09 settembre 2003 : 12:15:27
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Ciao..."collega", sono una ragazza iscritta a biotecnologie. Sto preparando un esame di biologia molecolare...avrei bisogno di informazioni sulla PCR: cos'è e a cosa serve.
Ti ringrazio in anticipo...
Sara
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atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 09 settembre 2003 : 15:18:30
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Ciao Sara,
Ti ringrazio per avermi contattato, spero che lo rifarai presto, rendendo ancor più ricco di interventi il seppur giovanissimo forum e sito.
Nella sezione Laboratorio ( www.molecularlab.it/laboratorio/tecniche/ ) troverai tutte le informazioni relative alla PCR ma forse un po' troppo tecniche e specifiche.
Qua sotto ti scrivo una versione di base a cui potrai far riferimento.
La PCR è una tecnica che prevede l’amplificazione di una sequenza di DNA di cui si conoscono gli estremi.
Per realizzarla si ha bisogno di:
.Sequenza da amplificare
.NTP (nucleoclosidi tri fosfati, come ATP, CTP, GTP, TTP)
.Primer (Sequenze complementarie agli estremi della sequenza da amplificare
.TAQ (una polimerasi estratta da un termofilo, in grado di non denaturarsi ad alte temperature)
.Buffer (i tamponi necessari per la reazione di elongazione)
La PCR avviene in una serie di cicli composti da tre fasi:
- nella prima abbiamo la separazione dei frammenti, fase che avviene ad alte temperature
- una fase di Annealing, appaiamento, in cui i primer si appaiono a filamenti
- a fase in cui la TAQ polimerasi sfruttando l’oh libero fornito dai primer, polimerizza usando come stampo la sequenza.
Nel primo ciclo si ha una duplicazione dal primer fino alla fine del frammento, ma ne cicli successivi si ha la amplificazione della sola sequenza compreso tra i due primers.
La PCR in realtà prevede numerose varianti, che permettono di far aggiungere delle “ali” negli estremi della sequenza. Oppure è usata per far aggiungere delle mutazioni nella sequenza (perché magari una sequenza genica).
Grazie ancora, spero di esserti stato utile,
Alla prossima,
Riccardo |
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Sara
Nuovo Arrivato
Città: Milano
2 Messaggi |
Inserito il - 09 settembre 2003 : 19:54:25
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Grazie a te per la velocissima risposta!! Non mancherò di ricontattarti in caso di bisogno!
Ciao
Sara
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atreliu
Amministratore
Prov.: Milano
Città: Milano
2484 Messaggi |
Inserito il - 20 settembre 2003 : 01:19:33
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Aggiunta nella sezione Principi, ulteriori informazioni, con uno schema che rappresenta un classico ciclo di PCR.
www.molecularlab.it/principi/
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