Purificazione piccoli frammenti

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Autore

Discussione

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 14 giugno 2007 : 19:53:53

Qualcuno di voi ha provato qualche kit per estrarre da gel o purificare da PCR piccoli frammenti attorno a 50-60bp?
Mi hanno detto che ci sono i kit della MACHEREY-NAGEL che dovrebbero andare bene, ed � possibile estrarre anche da gel di polyacrilamide... anche se non ho ancora trovato il protocollo.
Qualcuno li ha mai provati e sa dirmi come sono?

Patrizio
Moderatore

Citt�: Barcellona

1914 Messaggi

Inserito il - 18 giugno 2007 : 22:46:41

Ma che cosa ne dovresti fare dei frammenti di 50-60 pb? vuoi per caso isolare i tuoi bei dimeri forse di una PCR mal riuscita?
A parte gli scherzi......non ho mai avuto bisogno di isolare frammenti di queste dimensioni.....ma secondo me potresti utilizzare l'estrazione da gel d'agarosio al 2,5%,oppure farti una bella colonnina di sephadex G-25 e vai tranquilla...........
Ciao bellissima o almeno spero....
l'ultima frase non l'ho scritta io ma mio cugino

Dionysos
Moderatore

Citt�: Heidelberg

1913 Messaggi

Inserito il - 19 giugno 2007 : 06:44:34

Ma guarda un po'che sfacciato il nostro Patrizio (...e famiglia!!)

Io l'usai per separare frammenti di dimensioni oscillanti fra 30
e 70 bp (era un RFLP) da un gel acrilamide 18% in TBE, senza avere alcun problema

....

Volere libera : questa � la vera dottrina della volont� e della libert�
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 19 giugno 2007 : 15:23:08

Patrizio pensa che sono gi� grandi i miei frammenti! Prima erano anche pi� piccoli... ma � una lunga storia... e credimi se potessi allungarli con un'ultreriore PCR lo farei ben volentieri!!!
Io li faccio migrare in gel di Agarosio al 5% o in gel di Poliacrilamide ma il problema della maggior parte di kit di estrazione � che frammenti cos� piccoli non si fermano nella colonnina e vengono eliminati!

Grazie Dionysos... mi rincuori, allora ho qualche speranza!!!

Ma tu hai usato proprio quelli della MACHEREY-NAGEL?

Comunque ho contattato la rappresentante e mi porta un kit di prova

WOW! e mi hanno anche inviato il protocollo per gel di poliacrilamide!

Vi far� sapere se ce la faccio!!!

Grazie per le risposte!

e saluti al "solito" cugino sfacciato!!!