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chiaretta
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2007 : 19:02:17
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salve qlc saprebbe per caso dirmi come si dimostra tramite l'impiego di tre sonde la riduzione dell'espressione di c-myc in cellule cancerose trattate con ornitina decarbossilasi e cosa c'entrano gli esperimenti con i due vettori PTZ18R e PTZ19R???????
1 grazie anticipato
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Dea
Nuovo Arrivato
Prov.: Caserta
Città: Casapulla
17 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2007 : 20:11:46
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ehi signorina visto che mi hanno dato delle rispodste esaurienti ne approfitto che male c'è a beneficiare dell'erudizione altrui??? Vabbè un bacio bella |
Ransie Biotech |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2007 : 22:38:32
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Non è che hai un link ad un articolo o simile in cui fanno questo esperimento... detto così è un po' difficile da capire, non è proprio un esperimento standard che fai tutti i giorni in laboratorio. |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
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chiaretta
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 10:29:31
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l'ha spiegato il prof a lezione e purtroppo i miei appunti sn alquanto 1 disastro , ho intravisto l'articolo di GFPina xò nn mi sembra faccia riferimento alle sonde utilizzate x dimostrare l'esistenza del frammento di 400 nucleotidi. Praticamente il prof ha detto ke x dimostrare la riduz dell'espressione di c-myc in cellule COLO 320 trattate cn ornitina decarbossilasi si utilizzano 3 sonde marcate radioattivamente: 1 si appaia cn l'intero gene (c-myc) e rivela 1 riduz del segnale radioattivo rispetto al controllo e la presenza di un frammento di 400 nucleotidi, la sonda II si appaia con l'esone 3 rivelando sl 1 ridiz del segnale radioattivo e nn il frammento di 400 nucleotidi e la sonda III si appaia cn l'introne 2 rivelando sl la presenza del frammento di 400 nucleotidi ma nn la riduz del segnale radioattivo...Nn ho capito a cs siano dovuti qst risultati nè tantomeno l'esperimento in vitro volto a dimostrare il xkè dell'esistenza del frammento di 400 nucleotidi tramite l'utilizzo dei due vettori PTZ18R e PTZ19R. é alquanto complicato o almeno così mi sembra x cui se riusciste a raccapezzarvi in qst confusionaria spiegaz ke ho dato sarebbe fantastico |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 13:20:32
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Citazione: Messaggio inserito da chiaretta
ho intravisto l'articolo di GFPina xò nn mi sembra faccia riferimento alle sonde utilizzate x dimostrare l'esistenza del frammento di 400 nucleotidi.
Come no! Guarda la figura 1!
Se leggi con calma l'articolo c'è spiegato proprio quello che hai chiesto!
Comunque: innanzitutto le cellule COLO 320 non sono trattate con ornitina decarbossilasi, ma con DFMO che è un inibitore della ornitina decarbossilasi.
Per le sonde è esattamente come hai scritto:
Citazione: si utilizzano 3 sonde marcate radioattivamente: 1 si appaia cn l'intero gene (c-myc) e rivela 1 riduz del segnale radioattivo rispetto al controllo e la presenza di un frammento di 400 nucleotidi, la sonda II si appaia con l'esone 3 rivelando sl 1 ridiz del segnale radioattivo e nn il frammento di 400 nucleotidi e la sonda III si appaia cn l'introne 2 rivelando sl la presenza del frammento di 400 nucleotidi ma nn la riduz del segnale radioattivo
Dalla figura dell'articolo si capisce meglio, comunque:
- sonda I: è un grosso frammento che contiene sia esoni che introni e riconosce sia il trascritto di c-myc che il frammento da 400nt
- sonda II: è localizzata alla fine e si appaia con l'esone 3 di c-myc, riconosce quindi c-myc ma non il frammento da 400nt
- sonda III: è localizzata nell'introne 2, riconosce il frammento da 400nt ma non c-myc (perchè non riconosce esoni)
Citazione: ...Nn ho capito a cs siano dovuti qst risultati nè tantomeno l'esperimento in vitro volto a dimostrare il xkè dell'esistenza del frammento di 400 nucleotidi tramite l'utilizzo dei due vettori PTZ18R e PTZ19R.
Questi vettori sono utilizzati per fare sonde "strand-specifiche", cioè in grado di discriminare tra senso e antisenso.
- Sonde prodotte dal vettore PTZ18R-myc riconoscono il trasctitto "senso"
- Sonde prodotte dal vettore PTZ19R-myc riconoscono il trasctitto "antisenso"
Si hanno questi risultati:
- La sonda prodotta da vettore PTZ18R-myc riconosce un frammento da 2.2kb che è il trascritto di c-myc
- La sonda prodotta dal vettore PTZ19R-myc riconosce il frammento da 400nt che quindi è "antisenso" !!!
Ti consiglio comunque di leggere l'articolo, con questa spiegazioni non dovresti avere problemi a capire!
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chiaretta
Nuovo Arrivato
10 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 13:31:01
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Oh yeeahh grazie |
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Dea
Nuovo Arrivato
Prov.: Caserta
Città: Casapulla
17 Messaggi |
Inserito il - 03 luglio 2007 : 17:49:55
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ehi chiaretta mi sn appena messa al pc a quanto vedo dovrebbe essere chiaro l'articolo?!Speriamo un bacio bella |
Ransie Biotech |
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