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lamp
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
 Inserito il - 05 luglio 2007 : 16:37:31
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ciao a tutti, ho un problemino da risolvere. da poco mi è stato assegnato un nuovo progetto in lab su un argomento in cui dal punto di vista pratico sono quasi bianca . devo disegnare dei primers sia per RT-PCR che per la real time pcr per l'alfasinucleina e altre proteine coinvolte sul morbo di parkinsons...qualc'uno di voi mi sa dare delle dritte e una sorta di schema su come procedere?
grazie confido in voi
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lamp
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2007 : 18:17:54
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scusa ma dove devo proseguire?
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2007 : 22:58:21
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questo thread va bene per proseguire. Atreliu diceva di non scrivere lo stesso messaggio in due sezioni diverse perchè poi si fa confusione (uno ti risponde di qui, uno di là e non si capisce più niente).
Ad ogni modo, c'è un esempio di come generare primers in questo thread.
L'esempio va bene sia per RT-PCR che per realtime con SYBR Green. Se usi TaqMan allora è un po' diverso, dimmelo in caso.
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=1655 |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 06 luglio 2007 : 01:21:57
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| Se invece vuoi vedere se esistono già primers per real time per il tuo gene prova a guardare in questo database: RTPrimerDB |
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Aureus
Utente Junior
Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola
123 Messaggi |
Inserito il - 06 luglio 2007 : 14:36:18
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Un buon Primer deve avere un'alta specificità , ciò significa:
-Alto contenuto in GC 70-80%
-Lunghezza media dai 18-25 bp
-Non fare Primer Dimer
-Non fare hairping formation
-Avere una specificità unica nel templato
Queste sono le linee base per un buon primer, più è lungo il primer e più c'è la probabilità di hairping.
Oligo è un buon programma, sia per simulazioni di PCR, ma anche per la costruzione dei primer.
Per PCR: Le temperature di melting di annealing vanno teoricamente aggiustate a seconda del primer
Del resto i primer servono da innesco di replicazione, perciò lo puoi costruire a seconda delle esigenze..
Ciao! |
www.tlbspazio.it
Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi |
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lamp
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 07 luglio 2007 : 17:39:29
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grazie tante, seguirò le indicazioni
ciao rosaria |
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disegnare primer
Didattica
