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CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 10 luglio 2007 : 14:30:44

Ciao a tutti! ho un problema..
Sto effettuando delle trasfezioni con un gene codificante per una proteina che secondo noi induce proliferazione cellulare in vitro. La stessa trasfezione � stata effettuata CON UN pcDNA3.1 "vuoto" (Invitrogen)cio� codificante solo per il gene Galattosidasi.
E' corretto usare questo vettore come controllo negativo di trasfezione? Ve lo chiedo perch� la stessa intensa proliferazione cellulare che osservavo per il nostro gene la osservo anche con il vettore "vuoto".
Secondo voi questo � dovuto al plasmide di controllo che uso? Qualcuno di voi ha mai avuto problemi simili con questo vettore di controllo?
Grazie a tutti

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 10 luglio 2007 : 14:44:50

Mi sembra un controllo adatto.
La butto l�... ma le cellule che usi non si replicano normalmente?
Perch� in quel caso magari quello che vedi � la normale replicazione e la proteina che esprimi non induce proliferazione.
Cosa vedi se confronti cellule NON trasfettate con quelle trasfettate col plasmide vuoto?

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CRISTIAN
Nuovo Arrivato

92 Messaggi

Inserito il - 10 luglio 2007 : 15:12:23

Cosa vedi se confronti cellule NON trasfettate con quelle trasfettate col plasmide vuoto?

Le cellule non trasfettate non hanno questo aumento di proliferazione evidente mentre invece � evidente in quelle trasfettate con il plasmide "vuoto" e in quelle trasfettate per il gene codificante la mia proteina.. potrebbe essere dovuto ad un particolare inserimento nel genoma cellulare ospite che induce proliferazione in modo costitutivo??

P.S. la coltura cellulare usata � di cellule epatite (HepG2)