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Autore

Discussione

gio80
Nuovo Arrivato

Citt�: Palermo

5 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2007 : 11:27:21

salve a tutti potreste dirmi in cosa consiste la pcr colony e come si procede nella preparazione? grazie

... i fiori recisi ancora... profumano

gio80
Nuovo Arrivato

Citt�: Palermo

5 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2007 : 16:04:06

Ciao a tutti domani ho l'esame e sono in crisi.... potreste dirmi in cosa consiste la pcr colony e come si procede nella preparazione?
grazie a chi mi risponder�

... i fiori recisi ancora... profumano

GFPina
Moderatore

Citt�: Milano

8408 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2007 : 20:10:21

La Colony PCR serve per screenare dei cloni (batterici o di lievito) e verificare se � avvenuta l�inserzione del frammento nel plasmide.

In breve si procede in questo modo:

Si preleva con un ansa sterile parte della colonia che si vuole analizzare, si risospende in acqua sterile e la si utilizza come campione per la PCR. (alcuni mettono direttamente la colonia nella mix di PCR)

Si esegue una normalissima PCR che amplifica il frammento che �dovrebbe� essere inserito nel plasmide e si analizzano i risualtati su gel di agarosio.

Se visualizzi la banda vuol dire che il clone contiene il frammento altrimenti no!

AleXo
Moderatore

Prov.: Estero
Citt�: San Francisco, California

1550 Messaggi

Inserito il - 17 luglio 2007 : 20:21:30

io infatti "inzuppo' la colonia direttamente nel pcr mix!
L'unico step diverso che faccio rispetto ad una normale pcr e' uno step di denaturazione iniziale + lungo (10 min) per lisare completamente coli.