| Autore |
Discussione |
|
|
Vision82
Nuovo Arrivato
Città: Roma
29 Messaggi |
 Inserito il - 30 marzo 2005 : 12:19:25
|
Salve a tutti...
qualcuno può darmi informazioni su tale tecnica?
Ringrazio tutti
|
 |
|
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
 Inserito il - 30 marzo 2005 : 16:15:50
|
La RT-PCR è una tecnica che permette di fare una PCR partendo da RNA.
In pratica tu estrai l'RNA (totale o parziale, a seconda di quello che ti serve) dal tuo campione, poi lo retrotrascrivi utilizzando una retrotrascrittasi, come la MuLV (Moloney Murine Leukemia Virus), usando dei random examers come primer o, se vuoi solo l'mRNA poliadenilato, dei poly-dT; in questo modo ottieni il cDNA e poi procedi con una PCR normale.
La RT-PCR può essere fatta sia 2-step, cioè retrotrascrivi e poi usi il cDNA così ottenuto come templato x PCR o anche single-step, mettendo nel mix di reazione sia MuLV che DNA polimerasi e facendo tutto insieme.
Ciao!
nICO |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
 |
|
|
Vision82
Nuovo Arrivato
Città: Roma
29 Messaggi |
Inserito il - 30 marzo 2005 : 16:30:28
|
Ti ringrazio per la risposta...dettagliatissima...il problema è che avrei bisogno della pcr inversa e non della RT-Pcr...
La Pcr inversa ha la funzione di conoscere i due estremi sconosciuti partendo da una sequenza nota, non è la Race.
Grazie ancora a tutti... |
|
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
|
|
dallolio_gm
Moderatore
Prov.: Bo!
Città: Barcelona/Bologna
2445 Messaggi |
Inserito il - 01 aprile 2005 : 12:54:51
|
Non è per caso quella tecnica che è stata utilizzata per conoscere la posizione nella quale si è integrato un trasposone o un segmento di DNA con seq. LTR, in genomica?
E' una bella tecnica perchè in genere nessuno si ricorda che la PCR si può fare anche su DNA circolare.
Se non m i ricordo male:
-digerisci il DNA con un enzima di restrizione ad alta freq., controllando prima che il sito di taglio nn sia contenuto nella tua seq. nota (es. il trasposone)
-utilizzi una ligasi per circolizzare tutti i frammenti che si sono creati con la digestione
-a questo punto puoi fare la PCR, utilizzando come primer il 5' ed il 3' della tua seq. nota, invertendoli in modo da duplicare solo le basi adiacenti al tuo segmento (appunto con una PCR circolare)
-ti sequenzi i frammenti duplicati e li utilizzi per rintracciare la posizione in cui er aavvenuta l'integrazione, con un programma al computer. |
Il mio blog di bioinformatics (inglese): BioinfoBlog
Sono un po' lento a rispondere, posso tardare anche qualche giorno... ma abbiate fede! :-) |
|
|
|
Dino Zocco
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 12 aprile 2006 : 15:31:11
|
| ragazzi c'é differenza tra inverted PCR e RT-PCR...... |
|
|
|
chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 12 aprile 2006 : 22:39:35
|
La RT-PCR e' quella che ho spiegato nel secondo messaggio qui sopra (quindi estrai l'RNA e ricavi il cDNA che poi amplifichi)
Per la inverted (o inverse) PCR vedi i link nell'altro messaggio o vedi la spiegazione di dallolio_gm!
Ciao |
Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui
My photo portfolio (now on G+!) |
|
|
| |
Discussione |
|
Pcr inversa
Siti Scientifici
