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K1k4
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 06 settembre 2007 : 21:58:05

Salve a tutti,
avrei bisogno di un parere circa un esperimento di western blot!
In lab hanno condotto un western blot per verificare se la chemochina SDF1alfa attivi il pathway di mTor utilizzando gli anticorpi p-mtor, p-p70s6 e p4ebp1.Hanno utilizzato come controllo negativi cellule non trattate, poi hanno trattato le cellule solo con SDF,poi con SDF+AMD 3100(antagonista di CXCR4,che � il recettore di SDF) e con SDF+rapamicina (immunosoppressore che inibisce mTor).
Quello che non riesco a capire � qual � il controllo positivo di questo esperimento.
Grazie infinite a tutti

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 07 settembre 2007 : 02:02:28

Sinceramente non lo vedo.... il controllo positivo sarebbe il trattamento con qualcosa che sei certo attivi mTOR. Comunque non penso sia un problema visto che hai tutti i controlli negativi del caso.

L'unica cosa che io aggiungerei � un western per mTOR totale (non solo fosforilato), in modo da controllare che SDF non stia semplicemente aumentando la sintesi di mTOR (cio� ne vedi di pi� fosforilato semplicemente perch� ce ne � di pi�, non perch� ne hai stimolato la fosforilazione).

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K1k4
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 07 settembre 2007 : 09:09:37

Grazie tante per l'aiuto, sei stato chiarissimo!!!