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Autore

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lv85
Nuovo Arrivato

7 Messaggi

Inserito il - 11 settembre 2007 : 18:13:50

ebbene si sono ancora io e sono ancora alle prese con sto esame di biologia molecolare...ora ho un altro problema a che serve utilizzare dei precursori dNTP marcati in alfa in un sequenziamento????AIUTO!!!

i_bio
Nuovo Arrivato

Citt�: bari

85 Messaggi

Inserito il - 11 settembre 2007 : 18:44:23

utilizzi dNTP marcati in alfa perch� se tu li marcassi in beta o gamma, quando questi formano i legami fosfodiesteri con il dNTP successivo perderesti la marcatura perch� i gruppi fostati in beta e gamma vengono persi
spero di essere stata chiara...

memole
Utente Junior

Prov.: Brindisi
Citt�: brindisi

577 Messaggi

Inserito il - 11 settembre 2007 : 18:45:37

Ti servono dei dNTP marcati che siano per� dei dideossinucleotidi, aventi il gruppo ossidrile anche in posizione 3' oltre che in posizione 2'. In questo modo ogni qual volta tale nucleotide verr� inserito dalla polimerasi sar� impedita la formazione del legame 3'-5' e si interromper� la catena, in maniera del tutto casuale. In tal modo, alla fine, otterrai dei frammenti di lunghezza differente e potrai leggere la sequenza del filamento. Sono marcati in alfa perch� nel momento in cui si forma il legame tra il nucleotide trifosfato precursore e la catena � necessaria l'energia fornita da due legami ad alta energia del fosfato (scusa per il giro di parole), con la conseguente espulsione di un pirofosfato rappresentato dalle molecole beta e gamma del precursore.

lv85
Nuovo Arrivato

7 Messaggi

Inserito il - 11 settembre 2007 : 18:56:44

grazie per le risposte, ma credo di essere stato poco chiaro io nel formulare la domanda....io mi chiedevo a cosa serve marcare in un sequnziamento con il metodo di Sanger, visto che poi tutti i frammenti ottenuti possono essere facilamente visualizzati su gel e sono indicativi dei nucleotidi presenti nella sequenza da determinare....grazie e scusate per la mia po

ca chiarezza

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 11 settembre 2007 : 23:44:18

Il fatto � che nel metodo di Sanger visualizzi i frammenti con un'autoradiografia!
Cio� se i frammenti non fossero marcati non vedresti nulla

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