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michela
Nuovo Arrivato

Prov.: Reggio Emilia

23 Messaggi

Inserito il - 10 maggio 2005 : 12:51:55

Ciao a tutti!
Chiedo se qualcuno di voi � a conoscenza di qualche metodo di purificazione di cDNA alternativo a quello che sto usando il quale prevede l'uso di fenolo:cloroformio:isoamilico e passaggi diversi in etanolo.
Il mio cDNa � stato digerito con l'enzima RSAI e, dopo questa purificazione, quantificando con il Nanodrop noto un drastico calo di resa e un picco molto alto a 230 che mi fa presupporre la presenza di residui di fenolo o etanolo.
Sarei molto grata se qualcuno di voi potesse segnalarmi qualche protocollo alternativo.
Grazie!
Michela

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 11 maggio 2005 : 00:35:33

Mah, che io sappia questo � il metodo migliore... potresti provare ad usare qualche kit di estrazione (quelli con le microcolonnine, tanto x intenderci), che sicuramente ti dar� risultati in meno tempo con resa e purezza + alte.

Cmq, se leggi un picco alto a 230 puoi fare una seconda estrazione ripetendo tutti i passaggi da quando hai tolto il fenolo.
Che rapporto 260/280 leggi?

nICO

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michela
Nuovo Arrivato

Prov.: Reggio Emilia

23 Messaggi

Inserito il - 11 maggio 2005 : 16:36:07

ciao nico, il rapporto 260\280 non � ottimale ma neanche orrendo � sull'1,6 mentre il 260\230 � bassissimo.
Prover� a fare una qualche lettura con fenolo ed etanolo diluiti per vedere a quanto leggono.
Grazie mille!
michela