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masi
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43 Messaggi

Inserito il - 10 ottobre 2007 : 14:19:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di masi Invia a masi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Avrei bisogno di sapere se esiste qualche tipo di colorazione che permette di ottenere ben delineata la membrana plasmatica di cellule in coltura. Per valutare eventuali differenze morfologiche. Grazie

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 11 ottobre 2007 : 03:48:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Anche se non è generalmente usato per quello potresti provare ad usare del DiI.

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masi
Nuovo Arrivato




43 Messaggi

Inserito il - 11 ottobre 2007 : 09:58:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di masi Invia a masi un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie!
Potresti dirmi qualcosa di più dato che non ne ho mai sentito parlare?
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 11 ottobre 2007 : 12:48:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Certo! Il DiI è un composto che diffonde facilmente nei doppi strati lipidici.
E' un composto fluorescente quando è all'interno di una membrana lipidica.

E' generalmente usato come tract-tracer neuronale, cioè per "tracciare" le connessioni di un gruppo di neuroni. Ad esempio puoi impiantare un piccolo cristallo di DiI in una certa regione del cervello, questo andrà nelle membrane delle cellule in quella zona e poi diffonderà a) nella membrana della cellula b) nelle membrane delle cellule che sono a contatto con quella cellula.

Tu ovviamente non vuoi fare alcun tract tracing, ma se metti del DiI nella tua piastra tutte le cellule verranno marcate.

Molecular Probes lo vende, il product sheet (PDF) dice:

Labeling cell suspensions or adherent cells. Molecular Probes#700;
Vybrant(R) DiI, DiO, and DiD cell-labeling solutions can be added
directly to normal culture media to uniformly label suspended
or attached culture cells. Cell suspensions or adherent cells on
coverslips are incubated with the loading solution for 5 minutes
to 2 hours at 37°C. After loading, the cells are spun down, rinsed,
and resuspended in fresh medium. For adherent cells, labeling in
culture while attache d results in improved viability compared to
labeling after dissociation.

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