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noa84
Nuovo Arrivato
Prov.: Messina
23 Messaggi |
 Inserito il - 13 ottobre 2007 : 12:26:03
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Sto studiando un protocollo per l'allestimento delle diluizioni x determinare la mic solo che non ho capito bene...il protocollo dice:
1) distribuire tramite pipetta 1ml di terreno MHB nelle provette
2)aggiungere alla prima provetta altri 0,6 ml di MHB e 0,4 ml di soluzione madre del biocida da saggiare.Dopo agitazione mediante vortex trasferire 1ml nella seconda provetta.
3Continuare allo stesso modo con le altre provette scartando alla fine 1ml dell'ultima diluizione.(tecnica delle diluizioni a raddoppio)
quello ke non ho capito è:
-Nella prima provetta che rapporto di diluizione ho??1:2?
ma un rapporto di diluizione 1:2 non si poteva ottenere mettendo 1ml di biocida e 1ml di brodo??perchè me ne fa aggiungere 0,4 e 0,6???nelle provette successive che rapporto di diluizione ho???
Spero ke qualcuno possa chiarire il mio dubbio iperbolico!!!!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
 Inserito il - 13 ottobre 2007 : 12:50:34
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Nella prima provetta metti:
1ml di terreno MHB + altri 0,6 ml di MHB (in totale 1,6ml di MHB)
+ 0,4 ml di biocida (totale di tutto 2ml)
quindi hai 0,4 ml di biocida in 2ml totali (cioè 0,2 in 1ml) che è una diluizione 1:5
Poi per le altre diluizioni seriali utilizzi 1ml di questa diluizione 1:5 e la metti in 1ml di MHB quindi diluisci 1:2 "rispetto alla prima soluzione" che però era 1:5 rispetto al biocida quindi hai una diluizione di 1:10 del biocida e così via...
N° Diluizione
provetta del biocida
1 1:10
2 1:20
3 1:40
4 1:80
5 1:160
Se mettessi 1ml di terreno MHB + 1ml di biocida avresti una "diluizione 1:2 del biocida" e quindi proseguendo con le diluizioni scalari otterresti diluizioni del biocida di: 1:4,1:8,1:16,1:32.
Il protocollo ti dice di preparare 2ml perché ad ogni diluizione prelevi 1ml dalla provetta per metterlo nella successiva e quindi te ne rimarrà 1ml (che è quello che ti serve), solo nell'ultima provetta ti rimangono 2 ml, infatti il protocollo ti dice di scartarne 1ml.
Quindi tu manualmente fai delle "diluizioni al raddoppio" come è scritto sul protocollo ma la diluizione "effettiva" del biocida è quella che ho indicato in tabella.
Spero sia chiaro.
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noa84
Nuovo Arrivato
Prov.: Messina
23 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2007 : 14:26:25
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ciao!!!grazie tantissimo per la risposta...sei stata chiarissima e finalmente ho capito il protocollo!!! volevo solo un ultimo chiarimento..praticamente devo fare diluizioni 1: 10 1:20 1:40 solo per praticità?ovvero ai fini della metodica praticamente è lo stesso fare diluizioni 1:2 1:4: 1:8 indipendenti?(ovvero senza trasferire soluzioni da una provetta all'altra)?
grazie!!! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2007 : 15:24:58
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Ciao noa84!
Non so se ho capito bene la tua domanda... 
Provo a rispiegarti:
allora tu manualmente fai delle diluizioni 1:2 perché prendi 1ml dalla "provetta numero 1" e lo mettiti nella "provetta numero 2" che contiene 1ml di terreno, quindi 1ml in 2ml totali = diluizione 1:2.
Poi prendi 1ml dalla "provetta numero 2" e lo mettiti nella "provetta numero 3" --> stai facendo ancora una diluizione 1:2... ecc
Però devi tener presente che la "provetta numero 1" l'hai preparata in modo diverso:
0.4 ml di biocida in 2ml totali --> quindi la "provetta numero 1" contiene una diluizione del biocida 1:5
Sapendo questo se nelle provette seguenti tu fai una diluizione seriale 1:2 la diluizione del biocida sarà:
provetta 2: diluizione 1:2 di una diluizione 1:5 = diluizione 1:10
e ottieni questa tabella:
(lascia stare quella che ho postato prima perchè non ho indicato la prima provetta ma sono partita già con le diluizioni successive):
N° Diluizione
provetta del biocida
1 1:5 --> preparata da 1.6ml terreno + 0.4ml biocida
2 1:10 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 1
3 1:20 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 2
4 1:40 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 3
5 1:80 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 4
6 1:160 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 5
Se invece tu partissi facendo la "provetta numero 1" utilizzando 1ml di biocida + 1ml di terreno avresti una diluizione 1:2 del biocida anzichè 1:10!!! Sarebbe sbagliato!!!
E proseguendo a fare la diluizioni 1:2 nelle provette successive otterresti queste diluizioni del biocida:
N° Diluizione
provetta del biocida
1 1:2 --> preparata da 1ml terreno + 1ml biocida
2 1:4 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 1
3 1:8 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 2
4 1:16 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 3
5 1:32 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 4
6 1:64 --> preparata facendo una diluizione 1:2 dalla provetta 5
I passaggi che faresti tu manualmente sarebbero gli stessi a parte la preparazione della "provetta 1" ma le concentrazioni di biocida sarebbero sbagliate!!! Se sbagli nella preparazione della prima provetta poi ti porti dietro l'errore!
Se la tua domanda era questa: (scusa ma non ho capito bene se intendevi questo)
"se al posto di fare diluizioni seriali 1:2 trasferendo da una provetta all'altra faccio delle diluizioni singole nelle provette a partire dalla madre, cioè faccio una diluizione 1:2 nella prima provetta (1ml + 1ml biocida), 1:4 nella seconda (1.5ml + 0.5ml biocida)... è la stessa cosa?"
Allora concettualmente è la stessa cosa!
Però praticamente no, aumenta la possibilità di errore (sopratutto più usi volumi piccoli), se fai una diluizione seriale è più precisa e diminuisce la variabilità dovuta all'errore tra una provetta e l'altra.
Spero di aver chiarito i tuoi dubbi adesso!
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noa84
Nuovo Arrivato
Prov.: Messina
23 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2007 : 15:31:56
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non sò come ringraziarti!!1
hai ultra chiarito i miei dubbi!!!!
grazie ancora! |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 13 ottobre 2007 : 15:38:50
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Di niente!
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simba
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 12 aprile 2009 : 13:13:31
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| e qualcuno mi sa spiegare le diluizioni scalari? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 12 aprile 2009 : 23:16:28
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Citazione:
Messaggio inserito da simba
e qualcuno mi sa spiegare le diluizioni scalari?
 ... sono quelle che sono state spiegate!
Le diluizioni "seriali" sono le diluizioni "scalari" (seriali perchè le fai in "serie" e scalari perchè "scali" la concentrazione) |
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simba
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 14 aprile 2009 : 23:31:46
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| AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAH!!ok grazie!!infatti nn riuscivo ad immagginarmi quali potessero essere..pensavo fossero altre diluizioni fatte in altro modo!!meglio così cmq!:D |
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Problema con allestimento diluizioni per mic
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