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biomol
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65 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2007 : 12:59:02

ciao a tutti.devo programmare un esperimento di real time pcr, in particolare devo estrarre rna da crllule che hanno avuto trattamenti con sostanze diverse e vedere in quali cellule l'rna � maggiormente espresso.qualcuno sa darmi qualche informazione perch� io non ho mai fatto real time.ad esempio non credo di dover preparare degli standar?no?il mio standard dovrebbero essere le cellule non trattate...e poi devo fare prima rt e poi la real time o esiste un kit che fa tutto insieme?
grazie!!

Cangrande
Utente Junior

Prov.: Verona

280 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2007 : 18:33:50

Devi avere un altro controllo che ti permetta di standardizzare tra loro i diversi campioni. Mi spiego meglio. Tu hai il NT (non trattato) che ti serve per confrontare i risultati che otterai dai campioni trattati ma ti serve un gene costitutivo che non varia la sua espressione durante tutti i trattamenti per poterli standardizzare tra loro. � quello che viene definito controllo interno. Da cosa estrai l'RNA?
Per l'altro problema relativo al numero di passaggi (RT+real o RT e real separate) secondo me ti conviene fare nella maniera che ti � pi� comoda perch� non ho notato grandi differenze.

Magnifico atque victoriosissimo Domino, Domino Kani Grandi de la Scala.

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 15 ottobre 2007 : 22:46:11

http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=3813

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