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lisetta
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Cittā: mialno
91 Messaggi |
 Inserito il - 16 ottobre 2007 : 14:10:23
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ciao ragazzi sapete per caso dove posso trovare un protocollo ke mi indichi la preparazione di pentaclorofenolo e tretraidrossichinone per favore? grazie ciao elisa
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lisetta
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Cittā: mialno
91 Messaggi |
Inserito il - 17 ottobre 2007 : 16:03:46
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| io ho soluzione stock di pentaclorofenolo 2m ke devo preparare in etanolo e poi ho tetraidrossichinone soluzione stock fresco ke devo solubilizzare in dmso. cm devo fare? |
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lā
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 17 ottobre 2007 : 17:08:06
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ma qual'č la tua concentrazione finale di pentaclorofenolo in etanolo?
e del tetraidrossichinone?
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lisetta
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Cittā: mialno
91 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2007 : 08:58:15
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| ciao grazie mille per aver risp...praticamente io ho un protocollo se cosė si puō chiamare cn scritto pentaclorofenolo soluzione stocks di 2M preparato in etanolo di cui metto nel terreno contenente cellule da 25 uM a 500 uM e di tetraidrossichinone fresco solubilizzato in DMSO ne metto da 5 uM a 100 uM. Praticamente non mi hanno ancora dato la sostanza in mano. Perō vorrei sapere come faccio afare il calcolo nn so anche facendomi un es cn dati inventati cosė capisco il metodo. grazie elisa |
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chick80
Moderatore
Cittā: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2007 : 09:15:42
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1) Preparazione dello stock dalla polvere.
Sulla boccetta c'č il peso molecolare e da quello derivi quanto ne devi solubilizzare. Ad esempio, se la tua sostanza ha peso molecolare 170 g/mol e tu devi fare uno stock 2M in etanolo fai cosė (quello che segue č uno solo dei 1000 modi di fare i calcoli delle concentrazioni, puoi ottenere gli stessi risultati con altri metodi se preferisci).
Concentrazione 2M vuol dire 2 moli in un litro, oppure 2 millimoli in un millilitro (che č pių comodo, visto che probabilmente non farai un litro di stock).
Dal peso molecolare sai che una mole pesa 170 g, quindi una millimole pesa 170 milligrammi.
Quindi, 2 millimoli pesano 170*2=340 milligrammi e nel tuo stock metterai questi mg per ogni ml di etanolo.
Se vuoi fare 10 ml di stock pesi 3400 mg = 3.4g di prodotto e li dissolvi in 10ml di etanolo (per fare la cosa precisa dovresti dissolverli in meno di 10ml e poi portare a volume con etanolo, ma se non aggiungi tanta polvere l'aumento di volume č trascurabile).
2) Uso dello stock
Se devi mettere la tua sostanza nel terreno a concentrazione 100uM a partire dallo stock 2M vuol dire che devi diluire lo stock 20000 volte (diluendo 1000 volte vai da 2M a 2mM, diluendo altre 10 volte arrivi a 200 uM e diluendo 2 volte arrivi a 100 uM, quindi 1000*10*2=20000).
Questo significa che per ogni 20 ml (=20000ul) di terreno devi mettere 1 ul di stock.
Se prepari ad es. 100 ml di terreno ci aggiungerai 5ul di stock. |
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lisetta
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Cittā: mialno
91 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 13:23:15
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ciao scusa nn ho capito questo punto:
) Uso dello stock
Se devi mettere la tua sostanza nel terreno a concentrazione 100uM a partire dallo stock 2M vuol dire che devi diluire lo stock 20000 volte (diluendo 1000 volte vai da 2M a 2mM, diluendo altre 10 volte arrivi a 200 uM e diluendo 2 volte arrivi a 100 uM, quindi 1000*10*2=20000).
Questo significa che per ogni 20 ml (=20000ul) di terreno devi mettere 1 ul di stock.
Se prepari ad es. 100 ml di terreno ci aggiungerai 5ul di stock.
Se io ho pentaclorofenolo 2M e voglio mettere dai 25 uM ai 500 uM ke calcolo devo fare? grazie elisa |
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lā
Utente Junior
565 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 14:42:45
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CONCENTRAZIONE INIZIALE/CONCENTRAZIONE FINALE = FATTORE DI DILUIZIONE
VOLUME FINALE/FATTORE DI DILUIZIONE = VOLUME DEL REAGENTE DA AGGIUNGERE
fai cosė:
2M*1000= 2000mM, 2000mM*1000= 2000000uM
usando la formula sopra:
2000000uM / 25uM = 80000
100ml / 80000 = 0.00125ml---> 1.25 ul di pentaclorofenolo da aggiungere ai tuoi 100ml di terreno |
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lisetta
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Cittā: mialno
91 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 14:50:48
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| ok grazie mille penso di aver capito...i 100 ml di terreno sn presi a caso giusto?io devo mettere 25 uM nelle cellule e penso siano giā nel pozzetto ad es 24 well. Quindi se io ho 500 ul di terreno ke contiene giā un tot di cellule faccio: 500 ul/80000=0.00625 cioč 6.25 ul giusto? |
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chick80
Moderatore
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