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cri cri
Nuovo Arrivato
Prov.: Bari
Città: bari
6 Messaggi |
 Inserito il - 18 ottobre 2007 : 18:22:14
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Ciao a tutti! Sono una nuova iscritta di questo interessantissimo forum!
Ho una domanda per voi: sto imparando alcune nozioni sulla PCR perchè mi servono per un concorso. Non mi sono molto chiare le metodiche della diluizione scalare, dello standard interno ed esterno relativamente alla PCR quantitativa
Potete aiutarmi?Spero di essere stata sufficientemente chiara..
Grazie in anticipo!
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cri cri |
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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2007 : 19:51:54
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per diluizioni scalari penso si intenda una serie di diluizioni crescenti (o decrescenti) tipo 1:10, 1:100, 1:500...
per quanto riguarda lo standard, questo è il gene, a quantità nota, a cui si fa riferimento per quantizzare il tuo prodotto di PCR. Ad esempio, io utilizzo la G6PD (glucosio-6 fosfato deidrogenasi): sapendo l'espressione di questo gene e quindi la quantità, fai delle diluizioni scalari e per ognuna misuri il Ct, o ciclo soglia, ossia il punto in cui inizia la fase esponenziale dell'amplificazione. da questi dati ricavi una curva standard sulla quale vai a misurare il ciclo soglia del tuo gene ricavandone così la quantizzazione. (la teoria dovrebbe essere questa! verifica)
lo standard poi può essere interno (cioè nello stesso tubo, quindi nella stessa reazione di amplificazione) o esterno (in due tubi differenti). la scelta tra i due casi dipende da vari fattori quali ad esempio natura dei primers, ecc.
puoi vedere un tutorial all'indirizzo http://pathmicro.med.sc.edu/pcr/realtime-home.htm
ciao |
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cri cri
Nuovo Arrivato
Prov.: Bari
Città: bari
6 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2007 : 21:02:48
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| ciao Darkene!Grazie del tuo aiuto e dell'indirizzo che mi hai mandato,penso che mi sarà utile! |
cri cri |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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