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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
 Inserito il - 18 ottobre 2007 : 19:52:29
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Ho ordinato alcuni oligonucleotidi da usare come primer.
Sono arrivati liofilizzati con il certificato di analisi sul quale sono riportate queste informazioni:
Supponiamo che io risospenda il "liofilizzato" in un volume X (es.: 1 mL) di acqua sterile. Come faccio a sapere la concentrazione in nano/micro/milli-molare cosi' ottenuta?
Una volta che saprò la concentrazione, prenderò un'aliquota e mi farò una soluzione 10 micromolare da usare per le PCR.
Io ho fatto un calcolo ma non sono sicuro del risultato e vorrei il vostro aiuto... grazie  
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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
 Inserito il - 18 ottobre 2007 : 23:42:02
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secondo me il ragionamento da fare è questo:
n° moli = Molarità x Volume quindi M = n° moli / V
15,3 nmoli = 15300 micromoli
V = 1000 microliti (1 ml)
M = 15300 micromoli/1000 microlitri = 15,3 micromolare
Qual'è il tuo calcolo? |
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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2007 : 23:48:27
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cercando, ho trovato che:
mentre per RNA 1 OD = 40 microgrammi e per DNA 1 OD = 50 microgrammi, per un oligonucleotide 1 OD = 30-33 microgrammi
poi, inserendo la sequenza, ho usato questi due tool per calcolo che ho trovato qui sul forum in vecchie cartelle:
http://www.bmr-genomics.it/bmr_it/oligo_calculator.html
https://www.tib-molbiol.com/ sezione "OligoShop" --> Primer
e il calcolo torna...
15,3 micromolare...!!!
A questo punto non credo che risospendero' in 1 mL altrimenti poi dovrei pescare 653 microlitri per farmi la diluizione 10 micromolare... forse mi conviene un po' meno.
Grazie mille per il consulto! |
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byo_gio
Nuovo Arrivato
Prov.: MI
Città: Milano
66 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 15:05:35
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Citazione:
Messaggio inserito da darkene
secondo me il ragionamento da fare è questo:
n° moli = Molarità x Volume quindi M = n° moli / V
15,3 nmoli = 15300 micromoli
V = 1000 microliti (1 ml)
M = 15300 micromoli/1000 microlitri = 15,3 micromolare
Qual'è il tuo calcolo?
un piccolo dubbio...
tu hai scritto che 15,3 nanomoli = 15300 micromoli...
in realtà 15,3 nanomoli = 15300 picomoli!
quindi la micromolarità dovrebbe essere data dalle picomoli su microlitri...
correggetemi se sbaglio |
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 17:21:05
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in genere io metto tanta acqua o TE per arrivare ad una concentrazione finale di 100 micromolare e poi da questa faccio delle aliquote più diluite
Nel tuo caso dovresti aggiungere 153 microlitri per 15,3 nanomoli
in modo tale che 15,3 nanomoli su 153 microlitri = 100 micromolare
semplicissimo
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 19:50:21
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Citazione:
Messaggio inserito da byo_gio
un piccolo dubbio...
tu hai scritto che 15,3 nanomoli = 15300 micromoli...
in realtà 15,3 nanomoli = 15300 picomoli!
quindi la micromolarità dovrebbe essere data dalle picomoli su microlitri...
correggetemi se sbaglio
Si è giusto byo_gio!!!
1 microM = 1 picomole/microlitro
Comuque anch'io come Neuroscience faccio una diluizione stock 100micromolare e poi da queste faccio aliquote più diluite.
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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2007 : 20:22:47
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verissimo.
sorry! |
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pelotto74
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2007 : 00:50:41
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...anche io come GFPina e Neuroscienze preparo una Stock Solution 100micromolare...in questo caso aggiungendo 153 microlitri di acqua o TE |
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Giuju
Nuovo Arrivato
Prov.: Milano
Città: Milano
5 Messaggi |
Inserito il - 09 luglio 2009 : 14:20:40
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n° moli = Molarità x Volume
quindi V (uL) = n° moli (picomoli)/ M (uM)
per sapere quanto volume devi aggiungere al tuo liofilo, basta sapere il numero di moli ed esprimerle in picomoli, dividendole per la molarità che ti interessa (espressa in uM).
es:
V (uL)= 15300 picomoli/ 100 uM -- 153uL
nel caso ti servisse ad una molarità differente:
V (uL)= 15300 picomol/ 400 uM --- 38,25 uL
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giuju |
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