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Autore

Discussione

cri cri
Nuovo Arrivato

Prov.: Bari
Citt�: bari

6 Messaggi

Inserito il - 20 ottobre 2007 : 18:58:59

Mi date una mano a capire i metodi delle diluizioni scalari, dello standard esterno e dello standard interno nella PCR quantitativa?

Ne sapete qualcosa?
Grazie!

cri cri

Wee184
Nuovo Arrivato

Prov.: Siena
Citt�: Siena

8 Messaggi

Inserito il - 20 ottobre 2007 : 20:21:20

Le diluizioni scalari o seriali sono necessarie per poter identificare la concentrazione del tuo campione sconosciuto dopo una pcr. Si parte da un campione a concentrazione nota : poniamo per esempio che il tuo campione di partenza abbia una concentrazione di cDNA( calcolata a partire dalla concetrazione di rna con cui hai effettuato la tua RT ponendo un efficienza di reazione del 100%)di 10 ug. Decidi di applicare un fattore di diluizione 100 per ognipassaggio scalare:
10ug
0.10ug
0.001ug
e cos� via....

di solito bastano 5 o 6 diluizioni. Per verificare se la tua curva standard sia adatta ai tuoi esperimenti effettui dei tentativi caricando insieme ai tuoi campioni sconosciuti anche i punti di curva. Se le diluizioni di curva sono giuste la maggior parte dei tuoi campioni sconosciuti dovrebbe "caderti" in curva....
spero che sia stato chiaro in caso contrario mi dispiace. ciao.

Wee1... oh yes!!
WEE.. WHAT???