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sere85
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: monterenzio
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 Inserito il - 29 ottobre 2007 : 16:08:00
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ciao!!!
non riesco a capire un paio di cose sulla genetica inversa non è che potreste darmi una mano? grazie mille...
la genetica inversa da quello che ho capito richiede una sequenza genica ben caratterizzata per risalire alla funzione del gene oggetto di studio.Per risalire alla funzione del gene posso utilizzare:
-murtagenesi random (tipo trasposoni?)
-mutagenesi tramite delezioni e inserzioni (quiondi mutagenesi sito specifica? di cui fa parte la mutagenesi con PCR e la mutagenesi per delzione sito specifica?)
ma a questo punto che cos'è la mutagenesis by casette replacement? fa sempre parte della mutagenesi sito specifica? Quindi potrei dire che la mut.sito specifica comprende la mut. con PCR, la mut.per delezione progressiva e la mutagenesis by casette replacemeent? già che ci sono non è che qualcunoriuscirebbe anche a spiegarmila mutagenesi by casette replacement?!!! Ancora grazie a tutti per l'aiuto!!!!!
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Soltanto chi non ha approfondito nulla può avere delle convinzioni.
Emil Cioran |
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darkene
Utente Junior
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sere85
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: monterenzio
29 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2007 : 14:50:36
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ciao!
scusatemi ma io non ho capito tanto bene la mutagenesi in relazione alla genetica inversa, neanche dopo aver letto i link...
Con la mutagenesi io posso studiare la funzione di un gene quando conosco la sequenza del gene.
-come faccio a studiarlo?
1)posso sostituire una corta seq.di oligonucleotidi con una seq da me mutata(mutagenesi a cassetta).
2) posso creare una seq.di oligonucleotidi single strand mutata parzialmente complementare alla seq sul DNA bersaglio.In questo caso la polimerasi utilizza come primer la seq mutata e dirige la sintesi di un filamento complementare di DNA.Il DNA viene trasferito nelle cellule batteriche, circa metà dei plasmidi presenteranno la seq mutata, l'altra metà no.(mutagenesi oligonucleotidi-diretta)
3)posso utilizzare la PCR(utilizzo primer modificati all'estremità 5')
ma la mutazione all'interno dell'amplificato non l'ho capita per niente...
4)posso utilizzare la mutazione sito-specifica quindi delezioni, inserzioni,sostituzioni
Più o meno le ho considerate tutte?
grazie mille per l'aiuto |
Soltanto chi non ha approfondito nulla può avere delle convinzioni.
Emil Cioran |
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darkene
Utente Junior
291 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2007 : 17:46:13
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devi ragionare in questo modo.
la genetica classica studia il fenotipo per arrivare al genotipo, e quindi individuare il gene responsabile del fenotipo.
con l'avvento della biologia molecolare e del sequenziamento del genoma umano, si è passati alla procedura inversa. questo perchè il gene già ce l'hai, sia perchè hai la sequenza del genoma e quindi puoi predire possibili geni, sia ad esempio perchè analizzando gli mRNA hai le sequenze dei geni. a questo punto la domanda è: questo gene di cui so la sequenza, posizione e quant'altro, funzionalmente (quindi sul fenotipo) che fa? per fare questo cerchi con le varie tecniche che hai elencato di mutare la sequenza del gene per individuarne la funzione, in cellule o modelli animali come le cavie. le tecniche più utilizzate sono più o meno quelle che hai preso in considerazione.
per quanto riguarda la PCR, questa è la tecnica che ti permette di effettuare la mutazione sito-specifica (il tuo punto 4). per capire meglio leggi qui:
http://it.wikipedia.org/wiki/Mutagenesi_sito_specifica |
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sere85
Nuovo Arrivato
Prov.: Bologna
Città: monterenzio
29 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2007 : 18:33:02
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grazie mille per le risposte |
Soltanto chi non ha approfondito nulla può avere delle convinzioni.
Emil Cioran |
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genetica inversa
