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vesania
Nuovo Arrivato
Città: rovigo-ferrara-rovigo
98 Messaggi |
 Inserito il - 01 novembre 2007 : 11:21:53
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imminente esame di metodologie biochimiche e sono in crisi in quanto non riesco a capire capillary blotting del western. 
il gel ottenuto per esempio da elettroforesi viene posto su molti strati di carta da filtro imbevuti di tampone, e il foglio di nitrocellulosa viene posto al di sopra. quindi ora io ho filtri- gel- nitrocellulosa.
ora viene fatto passare del tampone sopra il gel ( e quindi sopra la nitrocellulosa?????) e il libro dice che si posizionano degli altri filtri asciutti ma dove? sopra alla nitricellulosa?
non capendo questi passaggi non capisco dove le proteine si posizionino (sull'ultimo filtro asciutto o sulla nitricellulosa) dopo il passaggio del tampone per azione capillare.
grazie.... 
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 01 novembre 2007 : 15:17:02
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le proteine si posizionano sulla membrana di nitrocellulosa, trasferendosi dal gel alla membrana. la membrana poi viene incubata con un anticorpo primario contro la tua proteina di interesse, ed uno secondario che lega il primario per riuscire a visualizzare la proteina.
tutto il sistema, filtri+gel+membrana, vengono immersi in un tampone di trasferimento che consente il passaggio di corrente di modo che le proteine possano essere trasferite. questo sistema viene chiamato sandwich e nel complesso è formato da spugna assorbente imbeavuta di tampone, filtri imbevuti di tampone, gel, membrana di nitrocellulosa (ma anche PVDF), altri filtri imbevuti di tampone, ultima spugna imbevuta nel tampone. tutto questo immerso nel tampone.
a vederlo è molto più semplice:dai un'occhiata a
questa immagine e a
quest'altra.
Ancora meglio, puoi dare uno sguardo alla sezione didattica di questo sito, sulle tecniche elettroforetiche eccoti un bel link: http://www.molecularlab.it/laboratorio/tecniche/elettroforesi.asp
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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vesania
Nuovo Arrivato
Città: rovigo-ferrara-rovigo
98 Messaggi |
Inserito il - 01 novembre 2007 : 16:18:06
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iside ti ringrazio per la risposta ma quello che tu descrivi come "il sistema, filtri+gel+membrana, vengono immersi in un tampone di trasferimento che consente il passaggio di corrente di modo che le proteine possano essere trasferite. questo sistema viene chiamato sandwich e nel complesso è formato da spugna assorbente imbeavuta di tampone, filtri imbevuti di tampone, gel, membrana di nitrocellulosa (ma anche PVDF), altri filtri imbevuti di tampone, ultima spugna imbevuta nel tampone. tutto questo immerso nel tampone." è definito elettroblotting....
io chiedevo spiegazioni sul capillary blotting che è solamente un' altro modo di effettuare il blot. comq ti ringrazio mille.
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western blotting - capillary blotting
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