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Discussione

biolmol
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 24 novembre 2007 : 18:20:31

sto studiando la struttura di una proteina carrier della membrana mitocondriale interna.dopo averla isolata ed inserita in proteoliposomi verifico la presenza di cisteine marcando la proteina, con una sostanza fluorescente, nella porzione idrofilica esterna(al proteoliposoma).la sostanza usata � la pirenil-maleimide in grado di reagire con i gruppi SH liberi delle cisteine.alla fine non ottengo la marcatura della proteina. questo � dovuto all'assenza di gruppi SH o al fatto ke quelli presenti sono tutti impegnati nella formazione di ponti di-solfuro? come lo scopro?ed eventualmente come riduco i ponti di-solfuro senza denaturare la mia proteina? grazie a tutti per l'aiuto!!!

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 24 novembre 2007 : 20:55:53

conosci la sequenza della proteina? ci sono cisteine libere o sono tutte impegante a formare ponti S-S?
la sostanza che usi per fare la marcatura immagino tu la compri da qualche produttore, nel qual caso dovresti vedere se il data-sheet dice qualcosa di specifico.
comunque credo che se hai ponti S-S e li riduci inevitabilmente perdi parte della struttura della proteina, quindi parzialmente la denaturi.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

biolmol
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 25 novembre 2007 : 14:16:39

no non conosco la sequenza e non so se tutte le cisteine formano i ponti.comunque grazie!

tommasomoro
Utente Junior

358 Messaggi

Inserito il - 26 novembre 2007 : 09:28:39

guarda che ste cose di marcare e fare analisi mass spec o altro

a me non convincono, hai bisogno di tutti i controlli positivi e negativi

che puoi immaginarti nella speranza che mutando le singole cisteine

la proteina sia ancora attiva e foldata in maniera corretta e venga espressa

con gli stessi livelli io investirei i prossimi 20 anni della tua carriera

scientifica nel tentare di otenere la struttura 3d della proteina

la letteratura e' piena di ipotesi bislacche

su cisteine (tra l'altro non conservate) che hanno funzioni strutturali/regolatorie

ciao e facci sapere come va tra un paio di annetti

T.