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Eziad
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
36 Messaggi |
 Inserito il - 24 novembre 2007 : 21:59:08
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vorrei qualche informazione su come cambiare i cicli di una PCR quando ottengo delle bande con molti aspecifici?? grazie
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Eziad |
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valefarfa
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: Teramo
24 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2007 : 00:00:57
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quello che devi fare è cambiare la temperatura di annealing dei primers.. probabilmente è troppo bassa affinche l'appaiamento sia specifico.. ti consiglierei di fare un gradiente, ovvero di provare, se hai il termociclatore adatto, ad aumentare solo la temperatura di annealing nei vari pozzetti dell'apparecchio, cosa che ti farà risparmiare tempo e fatica.. se così non dovesse funzionare allora rivedrei la sequenza dei primer e magari proverei a cambiarli..
spero di essere stato chiaro, altrimenti nn ti fare problemi a chiedere.. ciao |
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Neuroscience
Utente
659 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2007 : 00:30:08
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è giusto quello che dice valefarfa, quando hai degli aspecifici non devi cambiare i cicli, ma devi cambiare la temepratura di annealing.
I cicli si cambiano (abbassando) solo se hai una enorme quantità di prodotto specifico ed una quantità modesta di aspecifico
La temperatura in genere si alza quando hai troppo aspecifico...
oppure potresti aggiungere un po' di DMSO 0,5% fino a 5% alla reazione di PCR
tutto dipende dal rapporto specifico/aspecifico
e se l'aspecifico abbia un peso molecolare più alto o più basso
etc etc
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vladimiro
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2007 : 01:27:21
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premesso che quanto scritto sopra sono le variabili sicuramente più importanti da controllare ...io in casi estremi proverei a cambiare anche la concentrazione del magnesio e a controllare la purezza del dna che hai posto nella pcr ...non si a mai.
ciao
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più si sà e meno si conosce |
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Eziad
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
36 Messaggi |
Inserito il - 25 novembre 2007 : 18:39:10
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 Grazie millevolevo una ulteriore delucidazione: di quanti gradi devo cambiare la temperatura di annealing....
grazie mille per la vostra disponibilità |
Eziad |
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Eziad
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
36 Messaggi |
 Inserito il - 25 novembre 2007 : 19:34:25
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ciao neuroscienze il mio aspecifico ha un peso molecolare più basso rispetto al gene d'interesse, quindi come devo fare?
GRAZIE |
Eziad |
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valefarfa
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: Teramo
24 Messaggi |
Inserito il - 26 novembre 2007 : 12:17:40
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| ciao eziad, dovresti provare ad alzare la temperatura di annealing di 0,5 1 °C alla volta... certo che se hai, come ho già detto, una t-gradient, saresti molto più avvantaggiata... |
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Eziad
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
36 Messaggi |
Inserito il - 27 novembre 2007 : 13:18:23
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grazie
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Eziad |
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Didattica e Relazioni
