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antimo
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
 Inserito il - 27 novembre 2007 : 17:37:29
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Ciao, sono nuovo, vorrei subito porvi un mio problema.
Ho ultimamente purificato una proteina in un vettore PRSET B con Tag His all'N terminale, ma il problema non è la purificazione in quanto ne ho ottenuta tanta, ma con quale buffer dializare la proteina.
Il buffer di eluizione contiene 300mM Kcl, ho provato con 150mM e tris/Hcl pH 7 20mM ma la proteina precipita.
Come posso fare?
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antimo
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2007 : 18:04:35
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| Ma nessuno sa rispondermi, forse è un problema un pò antico, oggi la biologia risolve altri arcani |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2007 : 18:40:18
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Da come hai posto la domanda nessuno potrebbe risponderti, dovresti sapere la tua proteina in che buffer e' stabile... e non specifichi neanche di cosa si tratta e a cosa ti serve dopo la purificazione.
Prova a cercare in letteratura, altrimenti inizi a testare diversi buffer. |
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tommasomoro
Utente Junior
358 Messaggi |
Inserito il - 03 dicembre 2007 : 18:47:29
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Il buffer di eluizione contiene 300mM Kcl, ho provato con 150mM e tris/Hcl pH 7 20mM ma la proteina precipita.
Come posso fare?
magari provare con 300mM KCl???
T |
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antimo
Nuovo Arrivato
16 Messaggi |
Inserito il - 04 dicembre 2007 : 13:56:58
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Grazie per le risposte, la mia proteina è una chinasi di Sulfolobus Solfataricus, per ora ho fatto dei saggi di fosforilazione con la proteina risospesa nel buffer di eluizione (300mM Kcl) e sembra funzionare, ma vorrei purificarla meglio
Proverò a dializzarla contro un buffer di 300mM Kcl almeno elimino l'imidazolo(la purificazione è stata fatta con resina Ni-NTA)
Avete altri consigli?
Ciao e grazie |
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buffer di dialisi
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