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Eziad
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: Napoli

36 Messaggi

Inserito il - 07 dicembre 2007 : 18:23:41

Ho estratto l'RNA da una biopsia ed ho ottenuto una lettura negativa!!!!!
la biopsia l'ho immersa subito in buffer di lisi in ghiaccio credo che il procedimento sia questo?!?!?
Avete un protocollo di base per l'estrazione di RNA da biopsie?

Eziad

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 07 dicembre 2007 : 21:43:30

http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=24

http://www.protocol-online.org/prot/Molecular_Biology/RNA/RNA_Extraction/

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cin
Utente Junior

Prov.: Padova
Citt�: Padova

558 Messaggi

Inserito il - 08 dicembre 2007 : 08:47:32

Che tessuto era? Come � stato disgregato il tessuto?
La lettura dell'RNA era negativa allo spettrofotometro? Sei sicura di aver fatto la lettura correttamente? A volte ci si dimentica di moltiplicare per il fattore di diluizione.
Ho visto valori bassissimi di RNA ma negativi sinceramente no.
Quanto tempo � intercorso dal ghiaccio all'estrazione? E dall'estrazione alla lettura come � stato conservato l'RNA?

Eziad
Nuovo Arrivato

Prov.: Napoli
Citt�: Napoli

36 Messaggi

Inserito il - 08 dicembre 2007 : 15:08:43

Era una biopsia di un soggetto affetto da ipercheratosi gengivale.
il tessuto � stato omogeneizzato ed ho ottenuto una lettura negativa allo spettrofotometro,nn ho sbagliato i calcoli ed ho effettuato l'estrazione immediatamente conservandolo in ghiaccio.
per� c'� da dire che dopo la biopsia il medico nn ha messo subito il tessuto nel buffer di lisi e credo che il problema sia proprio questo.
che faccio la ripeto o proseguo nella sintesi di cDNA?
grazie

Eziad

cin
Utente Junior

Prov.: Padova
Citt�: Padova

558 Messaggi

Inserito il - 10 dicembre 2007 : 12:15:49

Se il problema dipende dal pezzo sar� difficile avere una lettura migliore in una successiva estrazione.
La cosa da fare per non gettare tempo e soldi inutilmente nel retrotrascrivere, sarebbe quella di vedere la qualit� dell'RNA con il Bioanalyzer dell'Agilent ( so che ne esiste uno simile della Bio rad) , prova a chiedere nei laboratori a fianco o comunque a chi si occupa di RNA sicuramente ne hanno uno, (mal che vada puoi chiedere direttamente alle due ditte sopracitate quale istituto pi� vicino a te ce l'abbia) e chiedigli se ti fanno gratuitamente una corsa, non penso che nessuno ti dir� di no.
Oppure retrotrascrivi e fai un 18S.
Ma il tutto dipende da cosa ce ne devi fare dopo, anzi � fondamentale.

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